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　?。?）檢樣中腸毒素檢測取腹瀉糞便加入生理鹽水做成1：10的乳劑，離心后取上清液置微量U形底孔反應(yīng)板上。以二倍遞增稀釋法稀釋，做成以下三列。
　　
　　*列：檢樣稀釋液+致敏紅細(xì)胞（或致敏乳膠粒）。
　　
　　第二列：檢樣稀釋液+未致敏的紅細(xì)胞（或未致敏的乳膠粒）。
　　
　　第三列：已知量的腸毒素稀釋液+致敏紅細(xì)胞（或致敏乳膠粒）。
　　
　　RPHA在2h，RPLA在5～10h后進(jìn)行凝集判斷。若*列與第二列反應(yīng)陽性的終點(diǎn)相同，則認(rèn)為有非特異性凝集存在。在這種情況下，可于檢樣中加入等量的50％未致敏的血細(xì)胞（或乳膠粒）進(jìn)行吸收后離心，取上清液再次進(jìn)行試驗(yàn)。確定非特異性凝集吸收后，即可與第三列對照作比較，計(jì)算出毒素含量。
　　
　?。?）培養(yǎng)液中腸毒素測定在產(chǎn)氣莢膜芽孢形成初期的菌體中含有腸毒素，當(dāng)芽孢成熟，菌體崩解時(shí)即游離到培養(yǎng)液中。因此可用產(chǎn)芽孢培養(yǎng)基24～48h培養(yǎng)后，用超聲波或溶菌酶處理，破壞菌體，離心所得到的上清液作檢樣。芽孢形成可用相差顯微鏡查明。腸毒素測定方法可用RPHA或RPLA。對培養(yǎng)液中腸毒素用RPHA或RPLA檢測時(shí)，幾乎看不到非特異性反應(yīng)。
　　
　?。?）分離菌腸毒素產(chǎn)生性試驗(yàn)產(chǎn)氣莢膜梭菌在試管內(nèi)不易形成芽孢，故有時(shí)即使為食物中毒菌A型、C型或D型，也有看不到芽孢、測不到腸毒素的情形。常給予75~C20min的反復(fù)熱刺激促使芽孢形成，并用促芽孢培養(yǎng)基。分離菌的腸毒素產(chǎn)生試驗(yàn)程序如下。
　　
　　被檢菌液0．1-0．5ml，接種庖肉培養(yǎng)基，置37~C2～4h后，進(jìn)行75℃20min熱水浴處理，取出再置37~C2-4h再進(jìn)行熱處理。必要時(shí)可重復(fù)3～4次。取出0．1-0．5ml轉(zhuǎn)種于硫乙醇鈉培養(yǎng)基37~C6h，再接種促芽孢培養(yǎng)基37~C72h，取少許涂片鏡檢·，觀察有無芽孢形成。若見到芽孢可進(jìn)行腸毒素測定。
　　
　?。?）其他毒素測定。從食品檢樣中提取毒素可以25g無脂肪檢樣在lOOmlHEPES[N-（2-hydroxyethyl）peraz洫e-N，-2-ethaesulfonicacid]緩沖液中，以300r／min絞切1rain。將勻質(zhì)物在5℃下，以20000r／min離心20min。取上清置冰箱內(nèi)1～2h，用濾膜濾器濾過滅菌。置濾液于透析袋內(nèi)，在15％一30％聚乙烯乙二醇（相對分子質(zhì)量為20000）透析到少于lOml?？晒┫率龈黜?xiàng)試驗(yàn)用。
　　
　　溶血試驗(yàn)取o．5ml10．5％綿羊紅細(xì)胞懸液于小試管內(nèi)，加上述毒素抽提液0．5ml，置37℃水浴中經(jīng)30min、60min、120min和24h，分別觀察溶血情況。
　　
　　致死試驗(yàn)取0．2ml毒素抽提液注射幾只小白鼠尾靜脈內(nèi)（或腹腔內(nèi)注射o．5m1），觀察3天，看其有無死亡。
　　
　　壞死試驗(yàn)以o．2ml毒素抽提液注射于家兔腹部皮下，連續(xù)3天觀察注射局部有無壞死現(xiàn)象。
　　
　　將毒素抽提液以0．5ml量分別與0．5ml抗產(chǎn)氣莢膜梭菌的標(biāo)準(zhǔn)血清（主要是A型至E型的抗毒素）混合，然后注射于小白鼠腹腔內(nèi)，觀察3天，看注射小鼠有無死亡。根據(jù)注射小鼠被動(dòng)保護(hù)作用，確定毒素型別。
　　
　　注：HEPES緩沖液使用濃度一般為10-50mmol／L，可以根據(jù)緩沖液能力的要求而定。
　　
　　10mmol／LHEPES的配制，稱取0．2385gHEPES，加入到l00ml培養(yǎng)液內(nèi)溶解，用lmol／L*調(diào)至pH7．o～7．2，過濾除菌后使用。