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免疫酶染色試驗(yàn)、免疫熒光試驗(yàn)診斷豬瘟
發(fā)布時(shí)間：2011-4-13
免疫酶染色試驗(yàn)
用酶標(biāo)抗體直接檢測病豬組織中的病毒抗原。感染豬瘟的腎臟皮質(zhì)部細(xì)胞被染成深褐色。應(yīng)用內(nèi)含o．01％*或o．01％疊氮鈉溶液的抑制內(nèi)源性酶，取得較好效果
。
采病豬扁桃體、脾、腎、淋巴結(jié)等病樣做壓印片或冰凍切片，標(biāo)本自然干燥后，在2％戊二醛和甲醛等量混合液中固定10rnin。干燥后，將標(biāo)本浸入0．01％*或0．01％疊氮鈉溶液的Tris-HCI緩沖液中，室溫下作用30rain。用pHL40．02mol／L磷酸鹽緩沖液漂洗5次，每次3min，然后風(fēng)干。將標(biāo)本置于濕盒內(nèi)，滴加1：10酶標(biāo)記抗體，37~C下3min：用pH7．40。02mol／L磷酸鹽緩沖液沖洗3～4次，每次2～3min，再用無水乙醇、二甲苯脫水，封片檢查。結(jié)果判定：用顯微鏡檢查，如細(xì)胞呈深褐色為陽性；黃色或五色則為陰性。豬瘟兔化弱毒接種的豬組織細(xì)胞漿呈微褐色，與強(qiáng)毒株感染有明顯區(qū)別。
免疫熒光試驗(yàn)
可分為直接免疫熒光和間接免疫熒光試驗(yàn)。
組織直接免疫熒光試驗(yàn)采集病變典型的可疑組織或臟器，用石蠟包埋后切片或冷凍后用冰凍切片機(jī)切成薄片，室溫下用丙酮固定lOmin并風(fēng)干組織片，之后用PBS沖洗組織片，抗體孵育（間接熒光分兩步進(jìn)行，直接熒光為一步），PBS再次沖洗組織片，風(fēng)干后在熒光顯微鏡下觀察熒光染色結(jié)果。該方法優(yōu)點(diǎn)：不需采集大量病變實(shí)質(zhì)組織，操作簡單。缺點(diǎn)：特異性和敏感性低，主觀性強(qiáng)。
間接免疫熒光試驗(yàn)在病豬組織上滴加1：4抗豬瘟陽性血清，作用30mln后洗滌再加羊抗豬IgG熒光抗體，作用30min后，漂洗、干燥、鏡檢。優(yōu)點(diǎn)：操作簡便，診斷迅速。缺點(diǎn)：成本昂貴，特異性差，主觀性強(qiáng)，需有經(jīng)驗(yàn)的檢驗(yàn)員操作，以區(qū)分好非特異性染色。
用酶標(biāo)抗體直接檢測病豬組織中的病毒抗原。感染豬瘟的腎臟皮質(zhì)部細(xì)胞被染成深褐色。應(yīng)用內(nèi)含o．01％*或o．01％疊氮鈉溶液的抑制內(nèi)源性酶，取得較好效果
。
采病豬扁桃體、脾、腎、淋巴結(jié)等病樣做壓印片或冰凍切片，標(biāo)本自然干燥后，在2％戊二醛和甲醛等量混合液中固定10rnin。干燥后，將標(biāo)本浸入0．01％*或0．01％疊氮鈉溶液的Tris-HCI緩沖液中，室溫下作用30rain。用pHL40．02mol／L磷酸鹽緩沖液漂洗5次，每次3min，然后風(fēng)干。將標(biāo)本置于濕盒內(nèi)，滴加1：10酶標(biāo)記抗體，37~C下3min：用pH7．40。02mol／L磷酸鹽緩沖液沖洗3～4次，每次2～3min，再用無水乙醇、二甲苯脫水，封片檢查。結(jié)果判定：用顯微鏡檢查，如細(xì)胞呈深褐色為陽性；黃色或五色則為陰性。豬瘟兔化弱毒接種的豬組織細(xì)胞漿呈微褐色，與強(qiáng)毒株感染有明顯區(qū)別。
免疫熒光試驗(yàn)
可分為直接免疫熒光和間接免疫熒光試驗(yàn)。
組織直接免疫熒光試驗(yàn)采集病變典型的可疑組織或臟器，用石蠟包埋后切片或冷凍后用冰凍切片機(jī)切成薄片，室溫下用丙酮固定lOmin并風(fēng)干組織片，之后用PBS沖洗組織片，抗體孵育（間接熒光分兩步進(jìn)行，直接熒光為一步），PBS再次沖洗組織片，風(fēng)干后在熒光顯微鏡下觀察熒光染色結(jié)果。該方法優(yōu)點(diǎn)：不需采集大量病變實(shí)質(zhì)組織，操作簡單。缺點(diǎn)：特異性和敏感性低，主觀性強(qiáng)。
間接免疫熒光試驗(yàn)在病豬組織上滴加1：4抗豬瘟陽性血清，作用30mln后洗滌再加羊抗豬IgG熒光抗體，作用30min后，漂洗、干燥、鏡檢。優(yōu)點(diǎn)：操作簡便，診斷迅速。缺點(diǎn)：成本昂貴，特異性差，主觀性強(qiáng)，需有經(jīng)驗(yàn)的檢驗(yàn)員操作，以區(qū)分好非特異性染色。