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技術(shù)文章

免疫酶染色試驗(yàn)、免疫熒光試驗(yàn)診斷豬瘟

發(fā)布時(shí)間:2011-4-13
  免疫酶染色試驗(yàn)
  
  用酶標(biāo)抗體直接檢測(cè)病豬組織中的病毒抗原。感染豬瘟的腎臟皮質(zhì)部細(xì)胞被染成深褐色。應(yīng)用內(nèi)含o.01%*或o.01%疊氮鈉溶液的抑制內(nèi)源性酶,取得較好效果
  
  。
  
  采病豬扁桃體、脾、腎、淋巴結(jié)等病樣做壓印片或冰凍切片,標(biāo)本自然干燥后,在2%戊二醛和甲醛等量混合液中固定10rnin。干燥后,將標(biāo)本浸入0.01%*或0.01%疊氮鈉溶液的Tris-HCI緩沖液中,室溫下作用30rain。用pHL40.02mol/L磷酸鹽緩沖液漂洗5次,每次3min,然后風(fēng)干。將標(biāo)本置于濕盒內(nèi),滴加1:10酶標(biāo)記抗體,37~C下3min:用pH7.40。02mol/L磷酸鹽緩沖液沖洗3~4次,每次2~3min,再用無(wú)水乙醇、二甲苯脫水,封片檢查。結(jié)果判定:用顯微鏡檢查,如細(xì)胞呈深褐色為陽(yáng)性;黃色或五色則為陰性。豬瘟兔化弱毒接種的豬組織細(xì)胞漿呈微褐色,與強(qiáng)毒株感染有明顯區(qū)別。
  
  免疫熒光試驗(yàn)
  
  可分為直接免疫熒光和間接免疫熒光試驗(yàn)。
  
  組織直接免疫熒光試驗(yàn)采集病變典型的可疑組織或臟器,用石蠟包埋后切片或冷凍后用冰凍切片機(jī)切成薄片,室溫下用丙酮固定lOmin并風(fēng)干組織片,之后用PBS沖洗組織片,抗體孵育(間接熒光分兩步進(jìn)行,直接熒光為一步),PBS再次沖洗組織片,風(fēng)干后在熒光顯微鏡下觀察熒光染色結(jié)果。該方法優(yōu)點(diǎn):不需采集大量病變實(shí)質(zhì)組織,操作簡(jiǎn)單。缺點(diǎn):特異性和敏感性低,主觀性強(qiáng)。
  
  間接免疫熒光試驗(yàn)在病豬組織上滴加1:4抗豬瘟陽(yáng)性血清,作用30mln后洗滌再加羊抗豬IgG熒光抗體,作用30min后,漂洗、干燥、鏡檢。優(yōu)點(diǎn):操作簡(jiǎn)便,診斷迅速。缺點(diǎn):成本昂貴,特異性差,主觀性強(qiáng),需有經(jīng)驗(yàn)的檢驗(yàn)員操作,以區(qū)分好非特異性染色。

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