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技術(shù)文章

核酸探針雜交技術(shù)檢測(cè)豬繁殖與呼吸綜合征

發(fā)布時(shí)間:2011-4-6

核酸探針雜交技術(shù)。Sur等(1996)以PRRSV的RNA為模板,通過RT-PCR擴(kuò)增ORF7中的433bp片段,應(yīng)用地高辛標(biāo)記方法制備PRRSV特異性cDNA探針,建立了檢測(cè)PRRSVRNA的原位雜交技術(shù)。

該方法可以在肺、淋巴組織、肺泡巨噬細(xì)胞(尸體剖檢后灌洗獲得)、淋巴集結(jié)、腎臟的感染細(xì)胞內(nèi)檢測(cè)到PRRSVRNA,較免疫組化具有更高的敏感性和特異性,特別是檢測(cè)感染后期細(xì)胞內(nèi)的PRRSV RNA。應(yīng)用生物素標(biāo)記方法制備互補(bǔ)于ORFlb(LV株)和ORF7(VR 2385株)的兩種寡核苷酸探針,建立了檢測(cè)福爾馬林固定肺和淋巴組織中PRRSVRNA的原位雜交技術(shù)(Park,et a1,1996),該技術(shù)有很好的敏感性,但操作比較煩瑣,在診斷上也較少應(yīng)用。
 

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