技術(shù)文章
免疫組化 免疫膠體金 免疫熒光檢測(cè)豬繁殖與呼吸綜合征
發(fā)布時(shí)間:2011-4-6①免疫組織化學(xué)技術(shù)。這是診斷該病較可靠的方法之一,可用于檢測(cè)PRRSV抗原的分布。Halbu,等(1994,1995)報(bào)道了檢測(cè)病豬肺臟內(nèi)的PRRSV抗原的親和素-生物素-免疫過氧化物酶方法;經(jīng)鼻內(nèi)接種105.8TCID50ATCCVR-2386毒株于4頭3周齡不喂初乳的仔豬,感染后第4天或第9天撲殺,并應(yīng)用建立的免疫組化技術(shù)檢測(cè)人工,結(jié)果肺,心、扁桃體、脾、淋巴結(jié)、胸腺組織檢測(cè)為PRRSV抗原陽性。Pol等(1991)使用免疫過氧化物酶染色檢測(cè)人工鼻內(nèi)接種6日齡SPF仔豬的肺、脾組織的冰凍切片,結(jié)果抗原呈陽性。
②免疫膠體金技術(shù)(DIGFA)。Mager等(1993)使用特異性單抗SDOW-17建立了檢測(cè)PRRSV抗原的免疫金銀染色方法(1GSS),用106.2TCID50LHVA-92-1和104.6TCID50LHVA-92-2PRRSV毒株分別進(jìn)行鼻內(nèi)人工接種3周齡的仔豬,人工感染后第6天或第8天撲殺,結(jié)果在酒精固定、福爾馬林固定及冷凍保存的肺臟組織中檢測(cè)到PRRSV抗原,在感染后第4天、第6天、第8天用酒精固定的扁桃體、淋巴結(jié)、胸腺、腎臟等組織中檢測(cè)到抗原。
③免疫熒光抗體染色技術(shù)。Benfield等(1992)制備了針對(duì)PRRSV核衣殼蛋白的單克隆抗體,這種單抗能與北美洲和歐洲的45株分離株反應(yīng),表明這種單抗是針對(duì)這些分離株的保守抗原決定簇。應(yīng)用異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記,建立了免疫熒光抗體染色技術(shù)用于直接檢測(cè)仔豬肺組織中的抗原。有的直接采集小豬的肺泡巨噬細(xì)胞(PAM)進(jìn)行培養(yǎng),用病毒特異性熒光抗體進(jìn)行診斷。
以上幾種病原檢測(cè)方法有的需要細(xì)胞培養(yǎng),工作量大,周期長(zhǎng),有的需要做組織切片甚至熒光顯微鏡,不利于基層檢測(cè)單位推廣應(yīng)用,因此在診斷上很少應(yīng)用。
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