技術(shù)文章
瓊脂凝膠擴(kuò)散試驗(yàn)(AGP)診斷禽流感
發(fā)布時(shí)間:2011-3-24AGP是在瓊脂凝膠中進(jìn)行的抗原-抗體免疫沉淀反應(yīng),主要用于病毒抗原型特異性鑒定,即用已知陽性血清和未知抗原進(jìn)行AGP試驗(yàn)。AGP是用來檢測(cè)A屬(型)流感病毒特異性血清抗體,即抗RNA-核蛋白(即RNP)和基質(zhì)蛋白(M1)抗體,因而適用于鑒定流感病毒。1970年Beard將AGP用于禽流感Ab的檢測(cè)。
該法優(yōu)點(diǎn)是簡便快捷,特異性強(qiáng),不受病毒亞型限制,缺點(diǎn)是靈敏性較低。
目前AGP法中zui常用的是免疫雙擴(kuò)散,與普通AGP法相比,不僅提高了其敏感度,且快速省時(shí),以此法為獲得了良好的結(jié)果。Ag制備:感染雞胚尿囊膜磨碎,反復(fù)凍融或超聲裂解,然后低速離心,上清滅活即可。1987年,我國學(xué)者報(bào)道了用AIV尿囊液經(jīng)超速離心、濃縮,用福爾馬林滅活制備Ag,效果較好。趙增連等在瓊脂板中加入3%的PECk6000,則AGP的敏感性提高,且快速省時(shí)。
免疫單輻射擴(kuò)散試驗(yàn)、單輻射溶血試驗(yàn)、對(duì)流免疫電泳等也常用于AIV及其抗體的檢測(cè),但這幾種免疫沉淀試驗(yàn)都需在凝膠中進(jìn)行,敏感性較差,對(duì)低滴度樣品都會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果,而且AGP所需試劑及Ag、Ab的量較大。所以尋找更敏感的微量、快速的檢測(cè)和診斷方法很有必要。
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