久久亚洲精品天码av,午夜福利屄插穴,午夜福利视频91,亚欧美爽爽爽爽爽,亚洲欧美日韩色色图片,青青操在线观看,精品天堂麻豆av,无码av东京热,婷婷成人亚洲少妇

產(chǎn)品展廳收藏該商鋪

您好 登錄 注冊

當(dāng)前位置:
上海源葉生物科技有限公司>技術(shù)文章>PCR診斷弓形蟲病

技術(shù)文章

PCR診斷弓形蟲病

發(fā)布時(shí)間:2011-2-26

PCR檢測 謝德華等(2005)以核糖體DNA*內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(1TSl)序列作為弓形蟲種特異的遺傳標(biāo)記,建立了豬弓形蟲病特異PCR診斷方法。

套式PCR(nestedPCR) 設(shè)計(jì)兩對引物,外引物含有內(nèi)引物的部分序列,經(jīng)兩次擴(kuò)增,大大提高了PCR的敏感性和特異性。糜祖煌以兩對月J基因引物建立了套式PCR擴(kuò)增弓形蟲基因,發(fā)現(xiàn)套式PCR比普通PCR敏感兩個(gè)數(shù)量級(jí)。Martinez等(2003)用套式PCR-ELISA檢測弓形蟲DNA,確定檢測閾值并與Southern印跡相對比,將雜交時(shí)間及探針濃度標(biāo)準(zhǔn)化,認(rèn)為PCRELISA法可以作為弓形蟲常規(guī)檢測試驗(yàn)。Vidigal等(2002)用套式PCP,檢測丁86例羊水,敏感度為62.5%,特異度為97.4%。Fuentes等(1996)報(bào)道以尿液進(jìn)行嬰兒先天性弓形蟲病的產(chǎn)前診斷,用巢式PCR進(jìn)行診斷,結(jié)果表明,在嬰兒先天性弓形蟲感染的確診中是一種非常有用的方法。鄭蘭艷等(2000)應(yīng)用ELISA—PCR檢測弓形蟲循環(huán)抗原研究認(rèn)為此方法是一種特異性強(qiáng)、敏感性高弓形蟲的檢測方法,其敏感性較ELISA方法提高了200倍并且認(rèn)為此方法檢出陽性結(jié)果時(shí)間早等優(yōu)點(diǎn)。另外,Jones等(2000)用P30、B1和rDNA三種靶序列來設(shè)計(jì)引物,通過套式PCR檢測眼房水弓形蟲DNA的方法來比較三者之間的敏感性,結(jié)果說明以月J基因作為靶基因的PCR是zui敏感的方法。

定量競爭PCR(quantitiativecompetitivePCR) 設(shè)計(jì)與目的基因有相同引物結(jié)合部位(同源性競爭模板)或有不同引物結(jié)合部位(異源性競爭模板)的內(nèi)參照,通過擴(kuò)增后內(nèi)參照的DNA產(chǎn)物含量來推算標(biāo)本中目的DNA或mRNA的含量。Lee(1999)設(shè)計(jì)了含4個(gè)引物結(jié)合位點(diǎn)的人工競爭物的定量競爭套式PCR檢測方法,競爭物可作為定量的參照,又可以檢測假陰性結(jié)果。Homan等(2000)用529bp重復(fù)序列作為靶基因檢測弓形蟲病原。

多重PCR(multiplexPCR) 為了同時(shí)檢測幾種病原體而在一個(gè)反應(yīng)體系中加入多對引物以擴(kuò)增不同的DNA片段,操作快速簡便。Roberts(1997)用多重PCR同時(shí)檢測AIDS患者腦脊液中弓形蟲及EB病毒,達(dá)到鑒別診斷的目的。

原位PCR(insitu PCR) 在組織切片或細(xì)胞涂片的原位對DNA或RNA進(jìn)行擴(kuò)增,將原位雜交的定位性與PCR的高敏感性結(jié)合起來,省卻了提取DNA的煩瑣步驟,可以同時(shí)觀察組織病變、進(jìn)行蟲體定位、動(dòng)態(tài)觀察蟲體的感染情況。李爽等(2000)用原位PCR方法檢測了10例弓形蟲感染的病理標(biāo)本,陽性率100%。

熒光定量PCR(FQ-PCR) 可采用與DNA雙鏈特異性結(jié)合的熒光染料(SYBRGreen 1),熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)的雜交探針技術(shù)及水解探針模式(即Taqman技術(shù))。探針熒光信號(hào)的強(qiáng)度隨基因量的增加而增加,從而達(dá)到定量的目的。試驗(yàn)采用閉管操作,避免了后處理時(shí)易出現(xiàn)的污染;實(shí)時(shí)定量檢測克服了傳統(tǒng)PCR方法的平臺(tái)效應(yīng)。Bretagne(2003)建立了實(shí)時(shí)PCR方法,自動(dòng)抽提DNA,并將其標(biāo)準(zhǔn)化,使得實(shí)驗(yàn)室間的結(jié)果對比及質(zhì)量控制成為可能。Ma等(2003)用熒光定量PCR的方法檢測了70位感染弓形蟲的孕婦的羊水和/或臍帶血以診斷胎兒感染,證明了母親感染弓形蟲DNA含量越高,胎兒感染率越高。Lin等(2003)以寡核苷酸為引物,建立了以熒光標(biāo)記的Taqman探針擴(kuò)增弓形蟲B1基因的實(shí)時(shí)PCR方法,可以檢測出含o.05個(gè)速殖子的標(biāo)本。

逆轉(zhuǎn)錄PCR(RTPCR) 以RNA為模板,在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下,由人工合成的引物介導(dǎo)生成cDNA模板,在TaqDNA聚合酶作用下,擴(kuò)增產(chǎn)生大量的特異性DNA片段。Cultrera等(2002)用RT—PCR檢測人標(biāo)本中慢殖子的表達(dá),從而區(qū)分急性感染或者慢性感染,擴(kuò)增MAGl、SAG4、SAGl基因以達(dá)到區(qū)分不同感染階段的目的。

 

收藏該商鋪

登錄 后再收藏

提示

您的留言已提交成功!我們將在第一時(shí)間回復(fù)您~

對比框

產(chǎn)品對比 二維碼

掃一掃訪問手機(jī)商鋪
在線留言
邹城市| 翁牛特旗| 福贡县| 如东县| 高平市| 利川市| 辽源市| 昌江| 葫芦岛市| 资溪县| 凤冈县| 隆昌县| 武陟县| 邵东县| 顺昌县| 汶上县| 蕲春县| 柘荣县| 临沂市| 金秀| 揭西县| 兴业县| 瑞金市| 台南县| 九江市| 盐津县| 大同县| 宿迁市| 武川县| 宁远县| 宜宾市| 崇阳县| 建水县| 长丰县| 河北区| 汶川县| 东光县| 壶关县| 封丘县| 梅州市| 临沧市|