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伊維菌素殘留檢驗(yàn)的液相色譜法
發(fā)布時間:2011-2-10(1)試劑和材料 除特殊注明外,所用試劑均為分析純,水為去離子水,符合GB/T582—1992二級用水的規(guī)定。
①甲醇:色譜純
②乙腈:色譜純
③固相萃取柱:Sep—pak Alumin B(500mg/6ml)
④N—甲基咪唑
⑤三氟乙酸酐
⑥伊維菌素標(biāo)準(zhǔn)品:純度≥95%
⑦標(biāo)準(zhǔn)貯備液:準(zhǔn)確稱取伊維菌素標(biāo)準(zhǔn)品100mg,用乙腈溶解于100ml容量瓶中,制成lmg/m1標(biāo)準(zhǔn)貯備液,一20~C冰箱中保存,有效期3個月。
⑧標(biāo)準(zhǔn)工作液:將lmg/ml的標(biāo)準(zhǔn)貯備液用乙腈稀釋成系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液。
⑨N—甲基咪唑—乙腈溶液:N—甲基咪唑—乙腈(1:1)。
⑩三氟乙酸酐—乙腈溶液:三氟乙酸酐—乙腈(1;2)。
(2)測定步驟
①提取 準(zhǔn)確稱取組織樣品勻漿物(10000r/min勻漿1min) (2.00+0.05)g,置于50ml聚丙烯離心管中,加入乙腈6.0ml,渦旋混合lmin,7000r/min離心5min,上清液即為樣品提取液。
②凈化 將固相萃取柱用乙腈4ml預(yù)洗后,取樣品提取液過柱,自然流出,收集于l0ml具塞試管中,再用乙腈3ml洗滌固相萃取柱,同樣收集于l0ml具塞試管中。
③熒光衍生化 將試管中的溶液在500c下用氮?dú)獯蹈?,殘存的微量水分?00c烘箱中烘15—20min。向試管中加入N—甲基咪唑—乙腈溶液100u1,渦旋混合30s后加入三氟乙酸酐—乙腈溶液150uL,試管內(nèi)立即出現(xiàn)白霧并放熱,立即將試管塞住,輕輕振蕩,30s后加入甲醇750uL,靜置15min后將溶液轉(zhuǎn)移至1ml進(jìn)樣瓶中供分析。
④標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 準(zhǔn)確移取一定濃度的伊維菌素標(biāo)準(zhǔn)工作液,按上述方法進(jìn)行熒光衍生化,上機(jī)測定。
⑤測定
a.色譜條件
色譜柱:C18柱
流動相:甲醇:水=92;8
柱溫:25~C
流速:1.0ml/min
進(jìn)樣量:50ul。
激發(fā)波長:365nm
發(fā)射波長:475nm
b.色譜測定 取適量試樣溶液和相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)工作液,做單點(diǎn)或多點(diǎn)校準(zhǔn),以色譜峰面積積分值定量。標(biāo)準(zhǔn)工作液及試樣液中伊維菌素的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測的線性范圍之內(nèi)。
⑥空白試驗(yàn) 除不加試樣外,按上述測定步驟進(jìn)行。
(3)靈敏度和回收率
本方法在豬和雞的肌肉、肝臟、腎臟、脂肪組織中測定伊維菌素的檢測限為lug/kg
在10~50ug/kg添加濃度水平上,回收率范圍為70%~90%。
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