技術(shù)文章
蛋白印跡法檢測(cè)技術(shù)原理
發(fā)布時(shí)間:2011-1-19蛋白印跡法檢測(cè)技術(shù)(immunoblottingtest,IBT)亦稱酶聯(lián)免疫電轉(zhuǎn)移印斑技術(shù)(enzyme linked immunoelectrotransfer blotting,EITB),因與Southern早先建立的檢測(cè)核酸的印跡法——Southernblot(DNA印跡法)相類似,亦被稱為Westernblot。
Western印跡法是將蛋白質(zhì)借高分辨率的PAGE電泳有效分離成許多蛋白區(qū)帶,分離后的蛋白帶經(jīng)電轉(zhuǎn)移至一種固相支持體如硝酸纖維素膜(NC)膜上,然后以抗體為探針,與附著于固相支持體的靶蛋白所呈現(xiàn)的抗原表位發(fā)生特異性反應(yīng),結(jié)合于固相支持體的抗體可用多種2級(jí)免疫學(xué)試劑(如125I標(biāo)記的A蛋白或抗免疫球蛋白,HRP或ALP耦聯(lián)的A蛋白或抗免疫球蛋白等)檢測(cè)。較常用的兩種電轉(zhuǎn)移法為:
①半干印跡,即凝膠與固相支持物夾在緩沖液浸濕的濾紙之間,然后通電10—30min;
②濕印跡,即凝膠與支持體夾心物浸入轉(zhuǎn)移緩沖液中進(jìn)行電轉(zhuǎn)移,至少需45min以上。
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