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技術(shù)文章
均相熒光免疫測定
發(fā)布時間：2011-1-12
均相熒光免疫測定（homogeneousfluorescenceimmunoassay）是根據(jù)1972年Rubenstein等建立的均相酶免疫測定法（HEl）發(fā)展形成的一種新型免疫熒光分析技術(shù)。所謂“均相”是指在反應(yīng)結(jié)束后無須對游離和結(jié)合的標(biāo)記物進(jìn)行分離，直接測定即可。均相熒光免疫測定是利用熒光的一些特殊的理化特性（如熒光的激發(fā)、吸收、淬滅等），在標(biāo)記抗原與特異性抗體結(jié)合后發(fā)生改變，據(jù)此設(shè)計建立的各種試驗方法。
（一）熒光淬滅免疫測定
熒光淬滅免疫測定（fluorescencequenchingimmunoassay）反應(yīng)系統(tǒng)內(nèi)除待測藥物外，同時加入某種待測小分子抗原和一定量用熒光物質(zhì)標(biāo)記的該抗原，二者與有*的特異性抗體競爭結(jié)合。當(dāng)抗體與此種標(biāo)記抗原結(jié)合時，發(fā)生淬滅作用使熒光物質(zhì)的熒光消失；因而無須分離直接測定反應(yīng)系統(tǒng)的偏振熒光強度。如樣品中未標(biāo)記抗原含量高，則競爭結(jié)合的抗體多，使游離的標(biāo)記抗原增多，經(jīng)紫外光激發(fā)后熒光強度高，二者呈正相關(guān)，據(jù)此可以定量測定樣品抗原含量。
?。ǘ晒獗Ｗo(hù)免疫測定法
1982年，Hanssan等在試驗中引入了抗熒光素抗體，以淬滅反應(yīng)系統(tǒng)中的游離熒光素。而對于已和特異性抗體結(jié)合的標(biāo)記抗原的熒光則無影響，即特異性抗體與標(biāo)記抗原結(jié)合后，可以保護(hù)其熒光免受抗熒光素抗體的淬滅作用，從而達(dá)到均相反應(yīng)的要求。當(dāng)樣品中未標(biāo)記的待測抗原含量高時，競爭與特異性抗體結(jié)合，使游離的熒光素標(biāo)記抗原增多，由于受到抗熒光素抗體的淬滅作用，受激發(fā)后熒光產(chǎn)生量反而減少，二者呈負(fù)相關(guān)，據(jù)此可以定量測定樣品中待測抗原的含量。熒光保護(hù)免疫測定法（fluorescenceprotectionimmunoassay）可用于測定甲狀腺素、人血清清蛋白、IgG等。
（一）熒光淬滅免疫測定
熒光淬滅免疫測定（fluorescencequenchingimmunoassay）反應(yīng)系統(tǒng)內(nèi)除待測藥物外，同時加入某種待測小分子抗原和一定量用熒光物質(zhì)標(biāo)記的該抗原，二者與有*的特異性抗體競爭結(jié)合。當(dāng)抗體與此種標(biāo)記抗原結(jié)合時，發(fā)生淬滅作用使熒光物質(zhì)的熒光消失；因而無須分離直接測定反應(yīng)系統(tǒng)的偏振熒光強度。如樣品中未標(biāo)記抗原含量高，則競爭結(jié)合的抗體多，使游離的標(biāo)記抗原增多，經(jīng)紫外光激發(fā)后熒光強度高，二者呈正相關(guān)，據(jù)此可以定量測定樣品抗原含量。
?。ǘ晒獗Ｗo(hù)免疫測定法
1982年，Hanssan等在試驗中引入了抗熒光素抗體，以淬滅反應(yīng)系統(tǒng)中的游離熒光素。而對于已和特異性抗體結(jié)合的標(biāo)記抗原的熒光則無影響，即特異性抗體與標(biāo)記抗原結(jié)合后，可以保護(hù)其熒光免受抗熒光素抗體的淬滅作用，從而達(dá)到均相反應(yīng)的要求。當(dāng)樣品中未標(biāo)記的待測抗原含量高時，競爭與特異性抗體結(jié)合，使游離的熒光素標(biāo)記抗原增多，由于受到抗熒光素抗體的淬滅作用，受激發(fā)后熒光產(chǎn)生量反而減少，二者呈負(fù)相關(guān)，據(jù)此可以定量測定樣品中待測抗原的含量。熒光保護(hù)免疫測定法（fluorescenceprotectionimmunoassay）可用于測定甲狀腺素、人血清清蛋白、IgG等。