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技術(shù)文章

固相膜免疫檢測技術(shù)

發(fā)布時間:2011-1-12
  固相膜免疫測定(solidphasemembrane-basedimmunoassay)與固相酶免疫測定(ELISA)相類似,其特點為以微孔膜作為固相。標(biāo)記物可用酶和各種有色微粒子如彩色膠乳、膠體金、膠體硒,以紅色的膠體金zui為常用。固相膜的特點在于其多孔性。像濾紙一樣,固相膜可被液體穿過流出,液體也可以透過毛細(xì)管作用在膜上向前移行。利用這種性能建立了兩種不同類型的快速檢測方法。
  
  在固相膜免疫測定中,穿流形式的稱為免疫滲濾試驗(immunofiltrationassay,IFA);橫流形式的稱為免疫層析試驗(immunochromatographieassay,ICA)。因常用膠體金作為標(biāo)記物,國內(nèi)文獻中稱前者為免疫金溶膠斑點法和滴金免疫測定法等,稱后者為膠體金免疫層析法等,統(tǒng)稱“金標(biāo)”。
  
  固相膜
  
  膜是固相膜免疫測定試劑的主要原材料,對于試劑的質(zhì)量起決定性作用。常用的膜為硝酸纖維素膜。硝酸纖維素膜本身為疏水性,在膜的制作過程中加入了表面活性劑,成為親水性,對蛋白質(zhì)有很強的吸附性能。在選擇合適的硝酸纖維素膜時應(yīng)注意以下特征。
  
  1.孔徑即能通過粒子的大小,以微米(Atm)表示。用于穿流法的膜一般選擇0.4um左右,用于橫流法的膜可選擇5~lOum。
  
  2.流速以ml/(cm2·min)表示。流速與孔徑有一定關(guān)系,孔徑越大,流速快。在橫流法中選擇合適的膜時,流速較孔徑更有參考價值。
  
  3.蛋白質(zhì)結(jié)合力以ug/cm2表示。
  
  4。均一性的膜應(yīng)具有良好的均一性,這樣才能保證試劑批號內(nèi)的均一性。

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