技術(shù)文章
聚合酶鏈反應PCR反應體系
發(fā)布時間:2010-12-18PCR是20世紀80年代由美國西特斯公司的一批科學家、技術(shù)人員和商人發(fā)明的,主要凱利·穆利斯(Kary Mullis)因此獲得了1993年的諾貝爾化學獎。其他科學家和技術(shù)人員,包括厄立克(Henry Erlieh)、安海姆(Norman Arnheim)、才木(Ran—daliSaiki)、霍恩(GlenHorn)、利文生(Corey Levenson),沙夫(StevenScharf)等都在造就PCR的理論和實踐過程中起關(guān)鍵作用。
聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction,PCR)PCR技術(shù)有助于鑒定某一特定的片段,它能在短時間內(nèi)地復制成百萬的該DNA片段,使一度非常稀有的實驗所需要的遺傳物質(zhì)變得豐富。遺傳物質(zhì)不但總量變多,而且不再受限于活的生物體。該技術(shù)與克隆技術(shù)相比較而言,克隆雖然也能使稀有的遺傳物質(zhì)變豐富,但必須采用活的生物體作為復制遺傳物質(zhì)的載體。PCR在擺脫此種活體依賴性方面前進了一大步,從而促進了基因操作效率的提高以及更重要的基因操作靈活性等方面的進步。PCR技術(shù)極大地擴展了遺傳物質(zhì)鑒定與操作的可能性,對分子生物學的現(xiàn)實與前景產(chǎn)生了不可估量的影響。PCR的新用途為科學研究開辟了新方向,這些新方向又反過來為PCR提供了新用途。現(xiàn)在,PCR已經(jīng)成為所有分子生物學實驗室的一個常規(guī)組成部分。
使用Taq耐熱DNA聚合酶的常規(guī)PCR擴增體系如下。
10×擴增緩沖液l0ul
10—50mmol/LTris—HCl(pH7.5~9.0)
6~50mmol/LKCl或(NH4)2S04
1.5~5.0mmol/LMgCl2或MgS04
四種dNTP混合物各200umol/L
每種寡核苷酸引物各0.1-1.0umol/L
耐熱DNA聚合酶2.0~2.5U
核酸模板102~105拷貝
加蒸餾水到100ul
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