在前PCR區(qū)建立PCR混合物。

⑴可以把即刻可用的“主混合物"溶液配好、分裝并保存在-20℃或4℃，在實(shí)驗(yàn)室凈化工程只涉及到擴(kuò)增一種或少數(shù)幾種特異序列時(shí)這樣做很有用。⑵如果你的實(shí)驗(yàn)室使用多套引物，以致于配制包括所有試劑的單一反應(yīng)混合物不夠經(jīng)濟(jì)，可以考慮分裝保存夠一天的PCR成分。⑶作為一個(gè)規(guī)則，應(yīng)該保存一套陰性、弱陽性和強(qiáng)陽性對照樣品來分析樣品配制和PCR前過程的效率和潔凈程度。而且，你也希望通過使用一個(gè)已知的弱陽性樣品來驗(yàn)證你的樣品緩沖液以證明里面不含擴(kuò)增抑制物。⑷陰性樣品要與每組樣品同時(shí)做，以分析是否存在樣品與樣品之間的污染以及是否存在PCR產(chǎn)物的污染，凈化工程陰性對照應(yīng)該包括核酸以外的所有試劑。⑸當(dāng)做陽性對照時(shí)，有兩個(gè)理由決定了應(yīng)該使用最少數(shù)量的核酸。⑹由于必須有對照反應(yīng)，對照模板的特點(diǎn)應(yīng)該予以考慮。

 

控制污染的方法。