詳細介紹
PCR實驗室并沒有嚴格的凈化要求,但是為避免各個實驗區(qū)域間交叉污染的可能性,適合用全送全排的氣流組織形式。同時,要嚴格控制送、排風(fēng)的比例以保證實驗區(qū)的壓力要求。
1、實際貯存和準備區(qū):PCR實驗室主要進行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝盒主反應(yīng)混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應(yīng)直接運送到這個區(qū),不得經(jīng)過其他區(qū)域。試劑原料必須貯存在本區(qū)內(nèi),并再本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。該區(qū)對與氣流壓力的控制沒有嚴格的要求。
2、標本制備區(qū):該區(qū)域主要進行的操作為樣本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入值擴增反應(yīng)管和測定DNA的合成。壓力梯度要求為:相對領(lǐng)巾區(qū)域為正壓,以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染,另外由于在加樣操作中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染,所以應(yīng)避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動。
3、擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū):該區(qū)域主要進行的操作為DNA擴增,此外,已制備的DNA模板(來自樣本制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可以在本區(qū)內(nèi)進行。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為負壓,以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染,應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的布必要走動,個別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺內(nèi)進行。
4、擴增產(chǎn)物分析區(qū):該區(qū)域主要進行的操作為擴增片段的測定,本區(qū)是主要的擴增產(chǎn)物污染來源,因此對本區(qū)的壓力梯度要求為相對鄰近區(qū)域為負壓,以避免擴增產(chǎn)物從本區(qū)擴散至其他區(qū)域。
進入實驗室區(qū)域工作人員應(yīng)該按照以下路徑:
公共清潔區(qū)→更衣間(更換潔凈服)→緩沖間→污染實驗區(qū)
工作人員退出實驗室的路徑為:
污染試驗區(qū)→緩沖間→淋浴間(有條件的可設(shè)置)→更衣間→公共清潔區(qū)
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