踏上純化之路，往往就要面對(duì)層析填料的選擇：填料類型、基架、配基、粒徑的不同….而在百林科層析填料家族中，有這么一類親和填料：團(tuán)隊(duì)成員雖少，利用好可以展現(xiàn)*作用，它們就是預(yù)活化填料，其可以根據(jù)項(xiàng)目類型選擇抗體、抗原、酶、小核酸或者多肽作為親和配基，純化能與之結(jié)合的相應(yīng)的配體。
面對(duì)不同類型預(yù)活化填料的選擇，往往讓大家迷茫，今天重點(diǎn)跟純化小伙伴們聊一聊，如何選擇預(yù)活化填料？
百林科不同類型預(yù)活化填料基本介紹
01 CNBr activated Chromstar 4FF
CNBr activated Chromstar 4FF預(yù)活化親和填料，通過(guò)生物分子之間的特異性的相互作用進(jìn)行分離純化，該填料常用于偶聯(lián)含氨基的高分子量配基。CNBr activated Chromstar 4FF 可實(shí)現(xiàn)含氨基蛋白配基多點(diǎn)連接，從而減少配基脫落，增加層析介質(zhì)穩(wěn)定性。
02 NHS activated Chromstar 4FF
NHS activated Chromstar 4FF預(yù)活化親和填料，通過(guò)生物分子之間的特異性的相互作用進(jìn)行分離純化。該填料常用于偶聯(lián)小分子蛋白或多肽，擁有穩(wěn)定性強(qiáng)的性能：與游離氨基快速結(jié)合，含有間隔臂，共價(jià)鍵化學(xué)穩(wěn)定性強(qiáng)；耐受較高的pH。
03 Epoxy-activated Chromstar 6B
Epoxy-activated Chromstar 6B 是一款瓊脂糖基架的預(yù)活化親和填料，可以通過(guò)配基上的羥基、氨基或巰基等基團(tuán)，進(jìn)行偶聯(lián)，以此形成特定的親和層析介質(zhì)，其擁有長(zhǎng)親水間隔臂，特別適用偶聯(lián)小分子配基。
圖1：百林科不同規(guī)格填料
關(guān)于 NHS 和 CNBr 的選擇？
實(shí)際應(yīng)用中，經(jīng)常碰到NHS 和 CNBr 如何選擇的問(wèn)題，兩款預(yù)活化填料最主要的區(qū)別是 ：
01 NHS 預(yù)活化填料的反應(yīng)位點(diǎn)與填料基架之間有間隔臂，而 CNBr 則沒(méi)有。當(dāng)需要結(jié)合的樣品是蛋白質(zhì)等生物大分子時(shí)，建議選擇NHS預(yù)活化填料，這樣可以降低由于空間位阻帶來(lái)的不利影響。
02 NHS能耐受較高的pH值，在pH 13時(shí)仍然非常穩(wěn)定，而NHS共價(jià)鍵化學(xué)穩(wěn)定性比CNBr高， 一般情況下，NHS 可以替代 CNBr 的應(yīng)用。
偶聯(lián)原理和注意事項(xiàng)
配基是通過(guò)其功能基團(tuán)的反應(yīng)偶聯(lián)到基質(zhì)上，因此偶聯(lián)方法的選擇取決于配基的特性。NHS或者CNBr填料通過(guò)配基的伯胺基團(tuán)進(jìn)行偶聯(lián)， Epoxy利用羥基、氨基或者巰基通過(guò)長(zhǎng)親水間隔臂進(jìn)行偶聯(lián)，一般偶聯(lián)糖類物質(zhì)居多。
在偶聯(lián)過(guò)程中，由于偶聯(lián)方式是針對(duì)某一個(gè)功能基團(tuán)進(jìn)行的，因此在準(zhǔn)備配基的溶液時(shí)，需要注意，選擇的緩沖液不能含有類似的功能基團(tuán)離子，例如，在使用NHS填料時(shí)，緩沖液不能是Tris這類帶氨基基團(tuán)的緩沖液，否則緩沖液中大量的氨基基團(tuán)會(huì)偶聯(lián)至填料上。偶聯(lián)時(shí)盡量選擇高純度的配基，以減少非特異性結(jié)合。不同配基偶聯(lián)條件不同，具體請(qǐng)參考說(shuō)明書中的內(nèi)容。
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