提到抗體項目的開發(fā)，最令研發(fā)人員“頭禿”的，莫過于目標產物變體(例如聚體和片段)去除，真是一不小心就容易“踩雷”。今天就給大家推薦一款“神器”--疏水層析介質。
通常情況下，目標產物變體(例如聚體和片段)去除的難點，往往在于其與目標產物性質的相似性，例如等電點相近，表面電荷差異小等等，這也給純化蛋白帶來不小的挑戰(zhàn)。
疏水作用，主要是利用分子表面的疏水性的差別來分離蛋白質和多肽等生物大分子的一種層析方法。在疏水層析介質的配基中，丁基Butyl -辛基Octyl -苯基Phenyl的疏水性在依次增加。通常，目標蛋白會在高鹽體系下與疏水性填料進行結合，在低鹽條件下進行洗脫；依照待分離物質疏水性強弱，調節(jié)上樣鹽濃度，達到依次洗脫的效果。
疏水層析示意圖
百林科可以提供包括MaXtar基架，MaXtar HR基架，Chromstar FF基架，Chromstar HP基架的不同疏水層析介質。其中，
MaXtar基架層析介質的平均粒徑是75μm，
MaXtar HR基架層析介質的平均粒徑是40μm，
Chromstar FF基架層析介質的平均粒徑是90μm，
Chromstar HP基架層析介質的平均粒徑是34μm。
應用案例 1
層析圖譜
? 層析柱：Chrom-Screen MaXtar Phenyl HR 4.7ml；10 cm
? 平衡液：20 mM Tris, 1 M (NH4)2SO4, pH 7.4
? 上樣：客戶樣品(調節(jié)電導至130 mS/cm)，載量30 mg/ml
? 洗脫液：20 mM Tris, pH 7.4
? 保留時間：5 min
純化前后SEC-HPLC檢測圖譜
(左圖：純化前；右圖：純化后)
小結：實驗圖譜和SEC-HPLC檢測圖譜分析得出，MaXtar Phenyl HR可將該樣品純度由95.41%提升至99.40%以上，聚體含量則由4.59%下降至0.60%，由此可見，MaXtar Phenyl HR對雙抗聚體去除效果明顯。
應用案例 2
層析圖譜
? 填料： Butyl Chromstar HP
? 層析柱：Chrom-Screen 4.7ml；10cm
? 樣品：雙抗樣品(調節(jié)電導至130mS/cm)
? 平衡液：20 mM Tris, 1 M (NH4)2SO4, pH 7.4
? 洗脫液：20 mM Tris, pH 7.4
? 保留時間：5min
純化前后SEC-HPLC檢測圖譜
(左圖：純化前；右圖：純化后)
小結：由層析圖譜和SEC檢測圖譜可以看出，Butyl Chromstar HP可將樣品純度由95.41%提升至98.8%，聚體含量則由4.59%下降至1.20%，去除聚體效果明顯。
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