多模式層析填料區(qū)別于傳統(tǒng)的層析介質(zhì),它由兩層不同的結(jié)構(gòu)組成:外殼是多孔的鈍化層,確保700KD以上的大分子不會進孔,直接走外水流穿;核心是偶聯(lián)了辛胺基團(同時具有疏水和正電荷吸附作用)的球形內(nèi)核,很大程度結(jié)合宿主蛋白、核酸等雜質(zhì)。該層析介質(zhì)能很好地用于多種大分子生物樣本的分離純化,比如:病毒及類病毒顆粒等。
多模式層析填料的特點:
1、與傳統(tǒng)離子交換劑相比具有不同選擇性的多模式陽離子交換劑。
2、高電導率下的高動態(tài)結(jié)合載量可提高生產(chǎn)率。
3、高體積通量可縮短處理時間。
4、較小的單元操作可進行經(jīng)濟高效的處理并減少投資。
5、填料可滿足供應(yīng)安全、性能穩(wěn)定和監(jiān)管支持方面的工業(yè)需要。
目前主流的多模式填料有陽離子+疏水以及陰離子+疏水。多模式層析結(jié)合了離子交換高分辨率的同時,結(jié)合了疏水層析高耐鹽的特性,使得層析過程可以在高鹽的條件進行上樣,從而有更高的可操作空間,適合復雜樣品的純化。多模式層析填料的篩選應(yīng)當注意目標產(chǎn)物的疏水性,對于疏水性較高的目標產(chǎn)物容易出現(xiàn)難以洗脫的情況(疏水性較高時,離子力以及疏水力的雙重作用使得目標產(chǎn)物與填料結(jié)合較為牢固難以洗脫,而采用高鹽洗脫時會導致填料的疏水性占主導從而導致收率較低的情況),因此對于疏水性較強的目標產(chǎn)物應(yīng)當選用配基密度較低的填料,或者在層析過程中添加精氨酸來削弱疏水力進行工藝開發(fā)。對于疏水性適中的目標產(chǎn)物則可以通過一系列梯度實驗進行填料篩選和工藝開發(fā)(例如,單一鹽梯度,單一pH梯度,在一定鹽濃度下拉pH梯度,在一定pH下拉鹽梯度,以及鹽和pH雙梯度)。
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