在反相色譜中,甲醇和乙腈是的二種有機(jī)試劑，由于二者性質(zhì)的差異，在使用中有一定的區(qū)別。
1價(jià)格，乙腈高于甲醇
在分析成本上，HPLC級(jí)的乙腈，價(jià)格比HPLC級(jí)的甲醇高的多。因此，一般的液相色譜分析有機(jī)試劑甲醇為多。但文獻(xiàn)所示的條件多用乙腈。
2吸光度，乙腈低于甲醇
所謂的HPLC級(jí)是指除去具有吸收UV的物質(zhì),其在規(guī)定的吸收波長(zhǎng)上的吸光度小于規(guī)格值,但并不是指的純度高。
從這四種試劑的吸收光譜看，HPLC級(jí)的乙腈吸收最小，尤其在低波長(zhǎng)上。因此在UV檢測(cè)時(shí)，其產(chǎn)生的噪音最小，在低波長(zhǎng)尤其明顯。所以在UV的低波長(zhǎng)上，高靈敏度檢測(cè)用HPLC的乙腈最合適。另外，在UV的梯度檢測(cè)上，HPLC的乙腈產(chǎn)生的鬼峰最少，同時(shí)由于其低的吸收值，梯度變化其吸收值變化最小，較大范圍內(nèi)的反相有機(jī)試劑梯度用HPLC乙腈宜。
甲醇的HPLC級(jí)和優(yōu)級(jí)的吸收光譜相差不大，但優(yōu)級(jí)不能保證吸光度，因此還是盡量使用HPLC級(jí)。
3壓力，乙腈低于甲醇
色譜柱內(nèi)的壓力，同很多因素有關(guān)，包括長(zhǎng)度、內(nèi)徑、顆粒大小、填料性質(zhì)、流速、溫度及流動(dòng)相等。但在實(shí)際分析過程中，影響壓力變化主要是流動(dòng)相中有機(jī)溶劑和緩沖液混合比例的不同，圖中表示了水/乙腈，水/甲醇混合液的比例與壓力的關(guān)系。從圖中可以看到，甲醇與水混合壓力增高，而乙腈同樣與水混合并不如此，乙腈明顯優(yōu)于甲醇。同時(shí)我們也看到溫度對(duì)壓力的影響，溫度升高，壓力下降。
4流動(dòng)相脫氣，乙腈要注意
這里只討論預(yù)先混合的流動(dòng)相配置問題。甲醇與水混合時(shí)會(huì)發(fā)熱，溫度升高，多余溶解的空氣較易變?yōu)槊摮鰵馀?，容易脫氣。而乙腈與水混合是吸熱反應(yīng)，隨著溫度慢慢回到室溫，產(chǎn)生氣泡，所以要考慮脫氣。
5洗脫強(qiáng)度，一般而言，乙腈大于甲醇
乙腈和甲醇與水混合二者比例相同，一般情況下，乙腈的洗脫能力強(qiáng)，尤其是混合比例低時(shí)。例如從和的洗脫看，相同的保留時(shí)間，乙腈的比率只需甲醇的一半都不到，而另一方面，當(dāng)有機(jī)溶劑100％或與此非常接近時(shí)，對(duì)于胡蘿卜素和膽甾醇來看，甲醇的洗脫能力往往比乙腈強(qiáng)。
6分離選擇性，有差異
乙腈和甲醇在分離的選擇性上有一定的差異，尤其是極性或離子化合物，出峰次序往往會(huì)不一致。在圖4中，和苯甲酸的洗脫次序改變。這是由于有機(jī)溶劑的化學(xué)性質(zhì)不同所致（甲醇是質(zhì)子性，乙腈是非質(zhì)子性）。因此，當(dāng)用乙腈（甲醇）不能獲得良好分離時(shí)可以試試甲醇（乙腈）。
7峰形，有時(shí)出現(xiàn)差異
對(duì)于像水楊酸化合物等，用乙腈時(shí)脫尾大，用甲醇則可抑制脫尾。這是由于對(duì)于硅表面與目標(biāo)成分有相互作用的流動(dòng)相的有關(guān)方，因有機(jī)溶劑分子的化學(xué)性質(zhì)不同而異，或者是對(duì)成分溶解能力的差異所造成的。
可是，一般情況下，聚合物反相柱在使用甲醇時(shí)比硅膠柱更具有峰形寬的傾向，特別是用聚苯乙稀柱分析芳香族化合物時(shí)常見，而用乙腈則效果好的多。
8結(jié)論
總之，對(duì)于反相色譜中常用的乙腈和甲醇，一般情況下使用HPLC乙腈，但用乙腈達(dá)不到效果時(shí)，可以試試HPLC級(jí)甲醇。
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