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上海山漢光電科技有限公司
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發(fā)布時間:2025-8-29
顯微鏡的照明方式都有哪些
顯微鏡的照明在顯微鏡觀察方式上是至關(guān)重要的,這直接是對于標(biāo)本的清晰還有還原色差有很大關(guān)系。因此根據(jù)顯微鏡的觀察方式和實驗的要求,顯微鏡的照明方式也是多種多樣。下面我們就來介紹顯微鏡的照明方式都有哪些?特點和功用都有些啥?
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由于光源的不正確使用,通常會導(dǎo)致樣品照明不足,因此復(fù)雜且裝備精良的顯微鏡經(jīng)常無法產(chǎn)生出色的圖像。當(dāng)優(yōu)化時,樣品的照明應(yīng)該是明亮的,無眩光的,并且均勻地分散在視場中。

有許多光源可用于照明顯微鏡,無論是常規(guī)觀察和關(guān)鍵顯微攝影。一個見的光源,因為它的成本低,壽命長,是50或100瓦的鹵鎢燈,如圖1中的顯微鏡圖的底部所示,這也詳細(xì)說明了在一個典型的現(xiàn)代透射光顯微鏡的光路。 在該圖中,鹵鎢燈發(fā)出中心為3200 K的連續(xù)光譜(當(dāng)燈電壓設(shè)置為+9伏時),然后通過收集器和場透鏡,然后反射到載物臺聚光器和樣品上。 成像光線被顯微鏡物鏡捕獲,并通過目鏡或分束器直接進入幾個相機端口之一。 在顯微鏡的整個光路中,照明從光源行進到樣品照明,然后進入目鏡或相機附件時,通過一系列光闌和透鏡進行引導(dǎo)和聚焦。 在現(xiàn)代顯微鏡中,顯微鏡光學(xué)元件的對準(zhǔn)以優(yōu)化照明是按照科勒照明規(guī)則進行的。更多的細(xì)節(jié)如何透射和反射光顯微鏡是正確的科勒照明對齊我們的章節(jié)中討論設(shè)置一個透射光和反射光顯微鏡。圖1中所示的光學(xué)路徑是透射光顯微鏡的典型路徑,涉及許多透鏡、光闌、反射鏡和分束器,以引導(dǎo)光通過顯微鏡。
探索如何在顯微鏡中控制透射光的光學(xué)路徑。
入門教程
鹵鎢燈相對明亮,其色譜中心在3200K(當(dāng)設(shè)置在約+9伏時),但需要顏色轉(zhuǎn)換濾光片將其色溫提高到日光等效。 另一種流行的光源是75到150瓦的氙燈,因為它的亮度很高,壽命長,在整個可見光譜中輸出相對均勻,色溫接近日光膠片乳劑所需的色溫。 在需要非常高的光強度的地方,經(jīng)常使用鹵化錫燈。在熒光顯微術(shù)中,特別是為了臨界顯微照相術(shù)的目的,通常使用100瓦或200瓦的汞燃燒器。在過去的幾年里,可能會使用碳弧燈或鋯燈泡,但這些來源今天很少看到。有關(guān)顯微鏡照明可用的寬光譜燈的更多信息和詳細(xì)討論,請訪問我們的顯微鏡和顯微攝影光源部分。
通過反射光顯微鏡中的光學(xué)路徑的源照明的對準(zhǔn)也是主要關(guān)注的問題,特別是關(guān)于金相學(xué)、半導(dǎo)體晶片檢測以及在熒光顯微鏡中正在取得的顯著新進展。反射光顯微鏡也用各種光源照明(如上所述),并可以使用科勒照明進行調(diào)整以獲得性能。這在我們關(guān)于反射光顯微鏡的科勒照明配置的部分中進行了更詳細(xì)的討論。反射光顯微鏡的照明路徑也是幾個交互式Java教程的主題,包括下面直接鏈接的一個。
探索如何在顯微鏡中控制反射光的光學(xué)路徑。
入門教程
在他的優(yōu)秀著作《通過顯微鏡攝影》中,約翰·德利認(rèn)為,在所有提交給競賽、展覽和科學(xué)出版物的顯微照片中,有80%到90%是光學(xué)對準(zhǔn)不當(dāng)導(dǎo)致樣品照明不良的受害者。 這是顯微鏡和顯微攝影見的問題之一,對許多大學(xué)實驗室的學(xué)生顯微鏡進行突擊檢查會發(fā)現(xiàn)大量調(diào)整不良的子臺聚光器和照明源。 我們懷疑,不正確的對準(zhǔn)和調(diào)整的substage聚光鏡和字段光圈,在整個范圍內(nèi)的目標(biāo)在一個給定的顯微鏡,是的來源,錯誤的顯微攝影。
適當(dāng)照明的必要性怎么強調(diào)也不過分。通常,一個25,000美元的顯微鏡由于照明和對準(zhǔn)不當(dāng)而降低到手動放大鏡的水平,導(dǎo)致顯微照片超過了在科勒照明的條件下使用2000美元顯微鏡拍攝的顯微照片。在本入門書的同伴部分中,我們討論了科勒照明理論及其實現(xiàn)(透射光和反射光),我們討論了顯微鏡配置的關(guān)鍵方面,并包含了各種交互式Java教程,以幫助學(xué)生掌握這些重要概念。
無焦或非聚焦照明-在光路中的某個點不形成光源圖像的照明系統(tǒng)稱為無焦或非聚焦照明。 在電燈泡發(fā)明之前,顯微鏡學(xué)家在選擇合適的顯微鏡照明光源方面受到限制。 在白天,他們可以將顯微鏡(或臺下反射鏡)指向天空,并將云層用作粗糙的漫射屏幕,將照明均勻地分布在整個視野中。 儀器制造商也研磨鏡子,以產(chǎn)生凹面反射表面,以增加物體平面上的光強。云和藍(lán)天不是光源,它們不容易在顯微鏡的光路內(nèi)成像,因此是無焦照明的來源。 室內(nèi)和夜間工作迫使早期的顯微鏡依賴于人工光源的照明,由于這些光源產(chǎn)生的固有色溫較低,使標(biāo)本的顏色在不同的強度,色調(diào)和色調(diào)下觀察到的自然日光。 為了彌補這一點,顯微鏡學(xué)家使用了各種類型的藍(lán)色濾光片來改變?nèi)嗽旃獾谋碛^色溫,使其與自然光的色溫緊密匹配。 然而,在沒有在光路內(nèi)的某處形成光源的圖像的情況下,這些各種早期的照明方法仍然屬于無焦或非聚焦照明的類別。
早期的研究表明,當(dāng)在日光和人造光源之間旋轉(zhuǎn)時,如果物鏡的后透鏡充滿光,(實際上)圖像的光學(xué)特性或分辨率沒有明顯的變化。 后來,科學(xué)家們發(fā)現(xiàn),最重要的要求是照明的數(shù)值孔徑至少等于物鏡的數(shù)值孔徑。 在世紀(jì),新的照明源被開發(fā)出來,一種新的“源聚焦"(后來稱為臨界或納爾遜照明)方法被開發(fā)出來,以改善顯微鏡照明條件。

臨界(或納爾遜)照明-這種顯微鏡照明方法首先由英國顯微鏡學(xué)家愛德華納爾遜使用恩斯特阿貝的光學(xué)原理開發(fā)。 從世紀(jì)后半葉到二十世紀(jì)世紀(jì),顯微鏡學(xué)家非常成功地使用了納爾遜照明。 今天,仍然有一些的關(guān)鍵照明誰繼續(xù)使用它與顯微鏡需要外部光源,或與更便宜的學(xué)生顯微鏡,其中顯微攝影是不是一個問題。
納爾遜照明依賴于使用substage聚光器,以產(chǎn)生一個聚焦圖像的火焰從燃燒的油燈(或其他均勻的光源)在平面上的標(biāo)本,以實現(xiàn)一個有點均勻的照明條件在整個視場。 光源的均勻性是考慮這種照明方法時的重要方面。 由燃燒的燈產(chǎn)生的火焰是相當(dāng)均勻和一致的,但其他來源,如磨砂放大燈泡,蛋白石燈泡,或帶狀燈絲也可以用于臨界照明。 圖2示出了使用提供均勻照明源的假設(shè)油燈的臨界照明的光學(xué)路徑。
從油燈火焰發(fā)出的光必須由載物臺聚光器聚焦(見圖2),以便在載玻片的標(biāo)本平面上產(chǎn)生火焰的圖像。實際上,通常很難(或不可能)在火焰的中心部分找到焦點,因此火焰的“邊緣"通常通過隨后重新調(diào)整子臺反射鏡來聚焦,使得火焰的中心部分的圖像填充視場。 進入顯微鏡的光量可以通過視場光闌控制,視場光闌(如果存在)通常附在外部。 必須有足夠的光進入顯微鏡,以充滿物鏡的后平面,這可以通過適當(dāng)調(diào)整聚光鏡孔徑光闌來控制。將光源聚焦在樣品平面上是不穩(wěn)定的,通常會產(chǎn)生顆粒狀、不均勻或斑點狀的背景。 這可以通過稍微散焦臺下聚光鏡來克服,以產(chǎn)生更均勻的背景。納爾遜照明法在很大程度上被更有效的科勒顯微鏡照明法所取代。
科勒照明-這個主題將在本書的另一節(jié)中詳細(xì)討論,但我們將在這里簡要介紹主要方面。 在科勒照明中,光源的圖像聚焦在聚光器孔徑光闌上,以產(chǎn)生通過樣品或物體平面的平行(和非聚焦)光。 聚光器下方(孔徑光闌處)的光源的放大圖像產(chǎn)生寬的照明錐,這是樣品的分辨率所需的。 聚光器孔徑光闌的尺寸可用于控制照明樣品的光錐的數(shù)值孔徑,并減少不需要的雜散光和眩光。此外,聚光器的玻璃表面上的灰塵和其他缺陷的成像被最小化。
有效的樣品照明在很大程度上取決于顯微鏡中所有光學(xué)部件(包括照明源)的正確對準(zhǔn)。 認(rèn)真的顯微鏡應(yīng)該熟悉每個組件的調(diào)整范圍,并應(yīng)實踐調(diào)整這些不同的樣品和目標(biāo)。 不均勻的照明會對顯微照片的質(zhì)量產(chǎn)生嚴(yán)重影響,導(dǎo)致“熱點",漸暈,彩色條紋,對比度差和各種其他不良影響。 一些的顯微鏡配備了“預(yù)先居中"的燈,不允許調(diào)整,有些甚至供應(yīng)沒有橫向調(diào)整機制的聚光鏡。 重要的是要確保這些顯微鏡在進行顯微攝影之前在工廠進行了適當(dāng)?shù)目评照彰鳌?仔細(xì)閱讀顯微鏡使用說明書和/或詢問您的工廠技術(shù)代表有關(guān)如何優(yōu)化這些顯微鏡照明的重要細(xì)節(jié)。
同學(xué)們通過以上介紹,照明對于顯微鏡的照明方式是不是有了一些了解了呢?歡迎來一起探討咨詢奧。
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