腺病毒igg抗體檢測試劑盒

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：腺病毒IgG檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英文名稱：NovaLisa® Adenovirus IgG ELISA

【產(chǎn)品規(guī)格】

96T

【預(yù)期用途】

本試劑盒可用于定性檢測人血清或血漿（檸檬酸鹽、肝素）中抗腺病毒igg的特異性抗體。

【前言簡介】

腺病毒是一種長度約為70-90納米的雙鏈DNA病毒。衣殼包含252個(gè)殼粒，呈二十面體對(duì)稱。衣殼由六鄰體、戊鄰體和纖維蛋白三聚體組成，它們負(fù)責(zé)誘導(dǎo)群型和類型特異性抗體。1953年，Rowe從扁桃體和腺樣組織中分離出腺病毒。目前已知的有80多種腺病毒。其中47例對(duì)男性有致病性。它們會(huì)引起多種不同器官系統(tǒng)的疾病，主要是眼睛、咽、呼吸和胃腸道系統(tǒng)。腺病毒感染是一種常見和常見的疾病，腺病毒igg的確認(rèn)可以有利于該病毒感染的早發(fā)現(xiàn)早確認(rèn)，縮短疾病窗口期以阻止重癥的可能性。大多數(shù)感染出現(xiàn)在兒童時(shí)期。它們潛伏通過，以便兩年后仍能在扁桃體中檢測到病毒。它通過唾液和糞便排泄。到身體的大門是口腔、鼻咽和眼的結(jié)膜。大多數(shù)感染在傳播時(shí)都沒有出現(xiàn)任何癥狀，但可以檢測到腺病毒igg。大約5%的兒童咳嗽和打噴嚏是由腺病毒引起的。流行病可能發(fā)生在擁擠的人群中，例如軍人群體中的急性呼吸道疾病、游泳池中的咽結(jié)膜熱和醫(yī)療設(shè)施中的流行性角膜結(jié)膜炎。醫(yī)院和游泳池的感染滿足了對(duì)衛(wèi)生學(xué)的特殊要求。

【檢測原理】

特異性腺病毒igg抗體的定性免疫酶學(xué)測定是基于ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）技術(shù)。微孔板上包被特定的抗原，以結(jié)合樣品的相應(yīng)抗體。洗滌微孔以去除所有未結(jié)合的樣品材料后，添加酶聯(lián)物，與捕獲的抗體結(jié)合。在第二個(gè)洗滌步驟中，未結(jié)合的共軛物被去除。通過加入四甲基聯(lián)苯胺(TMB)底物，得到藍(lán)色反應(yīng)產(chǎn)物，可以觀察到結(jié)合結(jié)合物形成的免疫復(fù)合物。該產(chǎn)品的強(qiáng)度與樣品中特異性抗體的數(shù)量成正比。加入終止液以終止反應(yīng)，藍(lán)色變成了黃色。使用酶標(biāo)儀器讀取450/620nm處的吸光度從而判斷腺病毒igg的存在。

【試劑盒組成】

1）微孔板                12x8，包被腺病毒抗原

2）樣品稀釋液          1×100ml，磷酸鹽緩沖液（10mM），pH 7.2 ± 0.2，即用型

3）終止液     1×15ml，硫酸，0.2mol/L，即用型

4）洗滌濃縮液   20倍濃縮，磷酸鹽緩沖液（0.2M），1×50ml，pH 7.2 ± 0.2

5）酶聯(lián)物     1×20ml，過氧化物酶標(biāo)記的人IgG抗體，即用型

6）底物液     1×15ml，3,3’,5,5’-四甲基聯(lián)苯胺（TMB），即用型

7）陽性質(zhì)控    1×2ml，即用型

8）臨界質(zhì)控    1×3ml，即用型

9）陰性質(zhì)控    1×2ml，即用型

10）封板紙     1x

11）使用說明書   1x

【所需的材料和設(shè)備】（未提供）

1）酶標(biāo)儀

2）37℃培養(yǎng)箱

3）手動(dòng)或自動(dòng)洗板裝置

4）移液器：10-1000µL

5）渦旋混合器

6）蒸餾水

7）一次性試管

【儲(chǔ)存條件】

腺病毒igg抗體檢測試劑盒必須儲(chǔ)存于2-8℃的環(huán)境中，打開的試劑在標(biāo)簽上規(guī)定的有效期內(nèi)是穩(wěn)定的。

【試劑準(zhǔn)備】

將所有的試劑和樣品平衡至室溫(20-25°C)，并在開始測試運(yùn)行前進(jìn)行混合是非常重要的！有將有利于對(duì)腺病毒igg的檢測實(shí)施。

洗滌液

用蒸餾水根據(jù)1+19稀釋洗滌濃縮液，例如，10 mL洗滌濃縮液+190mL蒸餾水混合。稀釋的洗滌液在室溫下（20-25℃）可保存5天，如果在濃縮液中出現(xiàn)晶體，則將溶液加熱至37°C，例如在水浴中。稀釋前攪拌均勻。

底物液

試劑為即用型，不需要稀釋。必須儲(chǔ)存在2-8°C，避光。溶液應(yīng)該是無色的，或者可以有一個(gè)輕微的藍(lán)色色調(diào)。如果基質(zhì)變成藍(lán)色，它可能已經(jīng)被污染了，應(yīng)該被扔掉。

【樣品采集和制備】

使用人血清或血漿（檸檬酸、肝素）樣品。如果在樣品采集后5天內(nèi)進(jìn)行檢測，樣品應(yīng)保持在2-8°C；否則應(yīng)分裝并深度冷凍保存(-70至-20°C)。如果樣品是冷凍保存的，在檢測前將解凍的樣品混合。避免反復(fù)凍結(jié)和解凍。不建議對(duì)樣品進(jìn)行熱失活。

樣品稀釋

腺病毒igg檢測前，所有樣品應(yīng)用IgG樣品稀釋緩沖液稀釋1+100。將10µL樣品和1 mL IgG樣品稀釋緩沖液加入試管中，渦旋混勻。

檢測步驟

1）加100µL標(biāo)準(zhǔn)品或質(zhì)控品和稀釋的樣品至相應(yīng)的微孔中，保留A1為空白對(duì)照。

2）用提供的封板紙封板。

3）37± 1 °C孵育1小時(shí)± 5 分鐘。

4）棄掉微孔中的內(nèi)容物，用稀釋的洗滌液沖洗孔3次(每次每孔300µL)。洗滌和吸入的時(shí)間間隔應(yīng)>5s。在吸水紙上用力擊打微孔板，以去除殘留的液滴。

5）加100µL酶聯(lián)物至每個(gè)微孔中，除了空白孔。

6）室溫下（20-25℃）避光孵育30分鐘。

7）重復(fù)步驟4。

8）加100µL底物液至每個(gè)微孔中。

9）在黑暗環(huán)境中室溫下孵育15分鐘。

10）加100µL終止液至每個(gè)微孔中。

11）在加入終止液溶液后的30分鐘內(nèi)，用酶標(biāo)儀讀取在450/620nm處的吸光度可以判斷腺病毒igg的檢測結(jié)果。

【測量方法】

使用空白對(duì)照孔，將酶標(biāo)儀調(diào)零。

如果由于技術(shù)原因，酶標(biāo)儀不能使用孔板空白值調(diào)零，則從所有其他測量的吸光度值中減去其吸光度值，以獲得可靠的結(jié)果！

在450nm處測量所有孔的吸光度，并在微孔板布局中記錄每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)/質(zhì)控和樣品的吸光度值。

推薦使用620nm的參考波長進(jìn)行雙色測量。

【結(jié)果】

運(yùn)行驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)：

為了使試驗(yàn)運(yùn)行有效，必須嚴(yán)格遵守這些使用說明，并必須滿足以下標(biāo)準(zhǔn)：

空白對(duì)照：吸光度值<0.100

陰性質(zhì)控：吸光度值<0.200和<臨界值

臨界質(zhì)控：吸光度值0.150-1.300

陽性質(zhì)控：吸光度值>臨界值

如果不滿足這些標(biāo)準(zhǔn)，則該檢測無效，必須重復(fù)檢測。

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