厭氧培養(yǎng)箱的操作規(guī)程

時間：2022/9/7

　　(一)操作室厭氧環(huán)境形成：

　　1. 按使用要求放置好必要的附件和器具;

　　2. 通電源開照明燈，開溫控儀，調節(jié)所需溫度;

　　3. 操作室內放入1000g鈀粒(封閉)和500g干燥劑，并放入美蘭指示紙(封閉);

　　4. 關緊取樣室內外門，并抽真空校驗;

　　5. 操作室內初次置換(氮氣置換)：

　　A. 把乳膠手套套在觀察板法蘭圈上并扎緊

　　B. 接通氮氣進氣路，打開氮氣控制閥1，使手套鼓起，關閉閥門1，然后扎緊袋口;

　　6. 操作室D二次置換(氮氣置換)重復一次充氮過程，取樣室先抽真空，并注意隨時用腳踏開關開閉排氣。如此連續(xù)三次氮氣置換。

　　7. 操作室D四次置換(混合氣體置換)：

　　(混合氣體配比為N2 85%、H2 10%、CO2 5%)

　　A. 調換氣路打開混合氣閥3進氣，充氣時取樣室先抽真空，并隨時用腳踏開關開閉排氣;

　　B. 關掉混合氣體閥3，并打開閥5，使混合氣體經過流量計，調整流量計，流量為每分鐘10ml左右;

　　C. 混合氣體重復2-3次轉換，經過上述過程，基本形成厭氧環(huán)境。

　　8. 操作室內打開粑粒除氧劑，接通除氧催化器電源進行催化除氧，一小時后打開美蘭指示紙觀察其變色狀況，不變色為操作室內達到厭氧環(huán)境;

　　9. 開紫外線滅菌燈，室內進行滅菌處理，滅菌時間按具體實驗自定。

　　(二)菌種的置入和培養(yǎng)：

　　1. 檢查取樣室內門并關緊;

　　2. 打開取樣室外門，將菌種放入取樣室后即關上外門;

　　3. 取樣室充氮置換三次過程：打開真空泵，先抽真空度500ml汞柱(66kPa)以上停，然后人工打開氮氣閥2進氣，使指針回復零位，關掉閥2。D二次重復操作一次。D三次操作時，使真空度500ml汞柱(66kPa)以上停，然后打開閥4進混合氣，使指針回復零位，關掉閥4。取樣室充氮置換三次過程結束;

　　4. 如選定真空度較低就需要增加置換的次數(shù);

　　5. 取樣室外門開啟、關緊，再抽低真空度100ml汞柱(13kPa)檢驗;

　　6. 厭氧培養(yǎng)箱需要長期連續(xù)使用的條件：

　　A. 每天在操作室內打開美蘭指示紙觀察，如不正常就重新?lián)Q氣;

　　B. 要長期連續(xù)輸入微量的混合氣體，使補進的氮氣能和微量的氧結合通過催化吸收，保證室內厭氧狀態(tài)，補入混合氣流量選定為每分鐘10ml左右;

　　C. 連續(xù)培養(yǎng)運行一天，更換一次除氧劑和干燥劑。

　　D. 操作室內溫度可任意選擇和控制。

　　7. 混合氣瓶、氮氣瓶輸出壓力調整：調節(jié)減壓閥，使輸出壓力0.1Mpa左右。

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