車(chē)間空氣滅菌臭氧發(fā)生器投加量及效果驗(yàn)證方法
藥廠車(chē)間臭氧滅菌效果驗(yàn)證：
首先看臭氧發(fā)生器使用是否正常；機(jī)器開(kāi)機(jī)是否正常；再看使用環(huán)境是否密閉；臭氧投送是否能到位；有沒(méi)從旁路泄漏；其次再計(jì)算車(chē)間的臭氧投加量是否足量；臭氧投加一般建議宜多不宜少；因?yàn)槌粞跞菀姿p；這是臭氧的特性；沒(méi)有辦法改變。如果都沒(méi)有問(wèn)題再看驗(yàn)證方法是否正確。
一；臭氧發(fā)生器滅菌效果達(dá)不到要求請(qǐng)按以下幾步檢測(cè)：
1：車(chē)間密閉性是否良好；車(chē)間物料是否放置過(guò)多；物料放置過(guò)多會(huì)損耗大部分臭氧；直接影響臭氧濃度的提高；
2：臭氧發(fā)生器啟動(dòng)工作后；*空調(diào)是否在工作；
3：臭氧發(fā)生器工作時(shí)；*空調(diào)是否有換氣；在用臭氧發(fā)生器時(shí)*空調(diào)送風(fēng)系統(tǒng)必須是采用內(nèi)循環(huán)；如果在臭氧滅菌時(shí)間是采用向外換氣是會(huì)把車(chē)間臭氧排掉的；導(dǎo)致車(chē)間臭氧濃度沒(méi)辦法升高；
4：臭氧發(fā)生器的冷卻水是否按標(biāo)示連接進(jìn)水和出水的；開(kāi)機(jī)時(shí)；冷卻水是否接通有流動(dòng)的水流動(dòng)；臭氧發(fā)生器的濃度調(diào)節(jié)閥是否打到了*；臭氧發(fā)生器的流量是否調(diào)節(jié)在4~5L之間；
5：臭氧發(fā)生器投加量是否計(jì)算正確；計(jì)算方法如下：
·衛(wèi)生消毒界習(xí)慣用ppm做單位。即體積百萬(wàn)分之一。對(duì)于空氣中的臭氧，1ppm=2.14mg/M3。
如果車(chē)間臭氧濃度要達(dá)到20ppm；換算出來(lái)則是20*2.14＝42.8mg/m3;建議按50mg/m3投加；如果車(chē)間滅菌要求達(dá)到10ppm；換算出來(lái)則是10*2.14＝21.4mg/m3;建議按22~25mg/m3投加臭氧。
　利用HVAC系統(tǒng)集中投加時(shí)，臭氧發(fā)生器選用按以下方法計(jì)算：首先計(jì)算實(shí)際臭氧消毒體積，實(shí)行體積由三部分組成V=V1+V2+V3，V1潔凈區(qū)空間體積，V2空氣凈化系統(tǒng)體積，V3循環(huán)時(shí)空氣損失體積，實(shí)際計(jì)算過(guò)程中V3等於循環(huán)系統(tǒng)總風(fēng)量(及補(bǔ)新風(fēng)風(fēng)量)的1.1%。根據(jù)《消毒技術(shù)規(guī)范》的標(biāo)準(zhǔn)確定臭氧滅菌的投加量(g/h)，車(chē)間如果臭氧濃度按20ppm計(jì)算；則臭氧投加量是42.8mg/m3;如果車(chē)間物料放置過(guò)多；按此投加量檢測(cè)臭氧濃度會(huì)有所偏差；偏差范圍約3~5ppm; 如有必要再考慮臭氧機(jī)投送臭氧管道及其它因素影響（臭氧發(fā)生器使用的環(huán)境溫度、濕度）；在正常使用狀態(tài)下忽略不計(jì)。
　　w=c*v/s w：實(shí)際選用臭氧發(fā)生器的產(chǎn)量，單位為g/h；c：?jiǎn)挝惑w積投加量
　　v：實(shí)際臭氧消毒體積s：臭氧衰退系數(shù)0.4208
　　如藥廠為空氣滅菌，潔凈室所需臭氧濃度定為c=20ppm，但事實(shí)上，潔凈區(qū)的消毒不僅是對(duì)空氣的消毒，實(shí)際上還包括物體表面的消毒。
　　工程技術(shù)參數(shù)
V1=消毒面積S=車(chē)間長(zhǎng)*車(chē)間寬*車(chē)間標(biāo)高H=車(chē)間總的m3
V2＝*空調(diào)投送風(fēng)管總的體積m3＝*空調(diào)投送風(fēng)管的長(zhǎng)*高*深
　V3=車(chē)間送風(fēng)量m3/h+補(bǔ)新風(fēng)風(fēng)量m3/h=總循環(huán)風(fēng)量*1.1%＝空氣損失體積m3
實(shí)際臭氧消毒體積V=V1+V2+V3
　所需臭氧投加量W=C*V/S
下面舉一實(shí)例：
如一個(gè)藥廠藥劑內(nèi)包車(chē)間的長(zhǎng)是55米；寬是15米；高是3米；*空調(diào)循環(huán)風(fēng)量是35000立方；*空調(diào)投送風(fēng)管總體積是65立方；要求達(dá)到20ppm;導(dǎo)入公式如下：
V1=車(chē)間長(zhǎng)55米*車(chē)間寬15米*車(chē)間高3米＝2475m3
V2＝車(chē)間風(fēng)管體積65m3
V3＝*空調(diào)循環(huán)風(fēng)量*1.1%＝35000m3*1.1%＝*空調(diào)風(fēng)量損失體積385m3;
實(shí)際臭氧消毒體積V=V1+V2+V3=2475m3+65m3+385m3=2925m3
　 所需臭氧投加量W=C*V/S c為臭氧投加量 20ppm 換算成mg/m3為20*2.14＝42.8mg/m3
導(dǎo)入數(shù)據(jù)：
所需臭氧投加量W=C臭氧投加量42.8mg/m3*V實(shí)際臭氧消毒體積2925m3/臭氧衰減系數(shù)0.4208
＝42.8mg/m3*2925m3÷0.4208
＝297.5克
如果臭氧投加量計(jì)算錯(cuò)誤是不能以增加開(kāi)機(jī)時(shí)間來(lái)增加臭氧濃度及滿足滅菌要求的；在臭氧投加量計(jì)算出入不是很大的情況下；延長(zhǎng)開(kāi)機(jī)時(shí)間在臭氧的持續(xù)作用下；是能滿足殺菌要求的；但臭氧濃度是不會(huì)因延長(zhǎng)開(kāi)機(jī)時(shí)間而增加臭氧濃度的。
譬如一個(gè)50立方的車(chē)間；經(jīng)過(guò)計(jì)算是選用一臺(tái)5克的臭氧發(fā)生器開(kāi)機(jī)一小時(shí)可以滿足滅菌要求；臭氧濃度檢測(cè)可以達(dá)到10ppm以上；但把這臺(tái)5克的臭氧發(fā)生器用在一間500立方的車(chē)間；不是說(shuō)開(kāi)機(jī)10小時(shí)也是能滿足滅菌要求的；臭氧濃度也不是和延長(zhǎng)開(kāi)機(jī)時(shí)間成正比的；不是說(shuō)這臺(tái)5克的機(jī)器在50立方的車(chē)間開(kāi)了10小時(shí)后臭氧濃度就能上升到100ppm;也許你開(kāi)上100小時(shí)也不能滿足500立方的車(chē)間滅菌。
二；臭氧滅菌效果檢測(cè)方法
1：用臭氧檢測(cè)儀檢測(cè)；臭氧發(fā)生器開(kāi)機(jī)1小時(shí)進(jìn)入滅菌車(chē)間檢測(cè)臭氧濃度；停機(jī)后再進(jìn)去檢測(cè)是不準(zhǔn)確的；如果不是內(nèi)循環(huán)的*空調(diào)；是每小時(shí)往車(chē)間外換氣10~20次的*空調(diào)則用臭氧發(fā)生器消毒殺菌后只能檢測(cè)車(chē)間沉降菌。
2：車(chē)間沉降菌檢測(cè)方法：
名稱：潔凈區(qū)微生物檢測(cè)操作規(guī)程
關(guān)鍵詞：潔凈區(qū)、微生物檢測(cè)
目 的：規(guī)范潔凈區(qū)微生物檢測(cè)
背景知識(shí)：略
原理：略
適用范圍：100級(jí)、1萬(wàn)、10萬(wàn)、30萬(wàn)級(jí)潔凈區(qū)環(huán)境(制藥廠按A B C D級(jí))。

1. 沉降菌檢測(cè)
   1. 在萬(wàn)級(jí)潔凈區(qū)內(nèi)的關(guān)鍵操作點(diǎn)和潔凈室內(nèi)每周檢測(cè)一次沉降菌和浮游菌；在10萬(wàn)級(jí)潔凈區(qū)內(nèi)其檢測(cè)頻次為每月檢測(cè)一次。30萬(wàn)級(jí)每季度檢測(cè)一次沉降菌。
   2. 由微生物檢測(cè)員按培養(yǎng)基的配制操作規(guī)程的要求配制肉湯瓊脂培養(yǎng)基，培養(yǎng)皿使用Φ90mm×15mm，于121℃濕熱滅菌20分鐘，取出備用。
   3. 做好潔凈區(qū)消毒工作，開(kāi)啟潔凈區(qū)凈化空調(diào)系統(tǒng)，正常運(yùn)行不少于30分鐘；對(duì)單向流如100級(jí)的凈化工作臺(tái)和層流罩要在凈化系統(tǒng)運(yùn)行10min后開(kāi)始。
   4. 靜態(tài)測(cè)試在除測(cè)試人員外，室內(nèi)無(wú)生產(chǎn)人員的情況下進(jìn)行，動(dòng)態(tài)測(cè)試在已處于正常生產(chǎn)狀態(tài)下進(jìn)行。
   5. 采樣點(diǎn)布置選用對(duì)角線法，要求布置地面四個(gè)方向，工作線上左右，關(guān)鍵設(shè)備頂上放置一個(gè)。
   6. 萬(wàn)級(jí)、10萬(wàn)級(jí)、30萬(wàn)級(jí)的zui少采樣點(diǎn)數(shù)可按下表確定。

在滿足zui少測(cè)點(diǎn)數(shù)的同時(shí)，還宜滿足zui少培養(yǎng)皿數(shù)，見(jiàn)下表

1. 百級(jí)區(qū)只有凈化工作臺(tái)下的局部范圍，其面積小于10m2，因此百級(jí)區(qū)取樣點(diǎn)至少為3個(gè)。
2. 測(cè)試人員按潔凈室級(jí)別規(guī)定的程序更換潔凈服進(jìn)入潔凈區(qū)；靜態(tài)測(cè)試時(shí)，室內(nèi)人員不得多于2人。
3. 將制備好的肉湯瓊脂培養(yǎng)基按采樣點(diǎn)布點(diǎn)位置離地0.8～1.5m處放置，打開(kāi)培養(yǎng)皿蓋，暴露30分鐘，檢測(cè)人員及時(shí)填寫(xiě)記錄，記錄房間溫濕度，壓差及測(cè)試狀態(tài)。
4. 蓋好皿蓋，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，在30～35℃中培養(yǎng)48小時(shí)，并用3只培養(yǎng)皿作對(duì)照。
5. 用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細(xì)觀察平皿上所有菌落數(shù)，要注意菌落與培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，然后用5～10倍放大鏡檢查有否遺漏。
6. 計(jì)算平均菌落數(shù) =（M1＋M2……＋Mn）／n，式中 M1：1號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù)，M2：2號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù)，n： 培養(yǎng)皿數(shù)。
7. 用平均菌落數(shù)判斷潔凈室空氣中的微生物， 潔凈區(qū)的平均菌落數(shù)（靜態(tài)測(cè)試）：100級(jí)≤1個(gè)/皿，萬(wàn)級(jí)≤3個(gè)／皿，10萬(wàn)級(jí)≤10個(gè)／皿，30萬(wàn)級(jí)≤15個(gè)／皿。
8. 如超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)，則必須對(duì)此區(qū)域重新消毒，重新采樣兩次，測(cè)試結(jié)果均須合格；否則要向質(zhì)量管理部通報(bào)，并采取相應(yīng)的措施。
9. 檢測(cè)人員必須向QA部門(mén)發(fā)“潔凈級(jí)別檢測(cè)記錄”，取樣和微生物培養(yǎng)及檢測(cè)人員均要在記錄上簽名，QA部門(mén)主管審核，記錄由質(zhì)量管理部保存三年。

1. 浮游菌檢測(cè)
   1. 對(duì)萬(wàn)級(jí)和10萬(wàn)級(jí)潔凈區(qū)要進(jìn)行浮游菌的檢測(cè)，在萬(wàn)級(jí)區(qū)內(nèi)的關(guān)鍵操作點(diǎn)和潔凈室內(nèi)每周檢測(cè)一次，10萬(wàn)級(jí)潔凈區(qū)內(nèi)其檢測(cè)頻次為每月檢測(cè)一次。
   2. 浮游菌取樣使用浮游菌采樣器，采樣器必須要有流量計(jì)和定時(shí)量，并按儀器的檢定周期，定期對(duì)儀器作檢定，以保證測(cè)試數(shù)據(jù)的可靠性。
   3. 采樣器進(jìn)入被測(cè)房間前要先用消毒劑滅菌，用于100級(jí)潔凈室的采樣器是一直放在房間內(nèi)；采樣時(shí)使用規(guī)定為Φ150mm×15mm培養(yǎng)皿。
   4. 由微生物檢測(cè)人員按《培養(yǎng)基的配制操作規(guī)程》的要求配制營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，于121℃濕熱滅菌20分鐘，取出備用。
   5. 浮游菌取樣與沉降菌一樣可分為靜態(tài)測(cè)試和動(dòng)態(tài)測(cè)試兩種狀態(tài)；各種潔凈度的采樣點(diǎn)數(shù)目和zui小采樣量如下表所示。

浮游菌取樣點(diǎn)數(shù)目及zui小采樣量

1. 采樣點(diǎn)布點(diǎn)位置離地0.8～1.5m處放置，送風(fēng)口測(cè)點(diǎn)位置離開(kāi)送風(fēng)面30cm左右；可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍增加測(cè)點(diǎn)；采樣點(diǎn)的布置與5)相同。
2. 對(duì)單向流如l00級(jí)凈化工作臺(tái)，測(cè)試要在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于l0min后開(kāi)始；對(duì)非單向流，如緩沖室、培養(yǎng)室，測(cè)試要在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于30min后開(kāi)始。
3. 采樣者必須穿戴與被測(cè)潔凈區(qū)域相應(yīng)的工作服，在轉(zhuǎn)盤(pán)上放入或調(diào)換培養(yǎng)皿前，雙手要用消毒劑消毒；培養(yǎng)皿表面必須嚴(yán)格消毒。
4. 采樣口及采樣管在使用前必須高溫滅菌，要用消毒劑消毒采樣器的頂盤(pán)，轉(zhuǎn)盤(pán)以及罩子的內(nèi)外面；對(duì)采樣管的外壁和內(nèi)壁進(jìn)行消毒后，要將管中的殘留液倒掉并晾干。
5. 儀器經(jīng)消毒后先不放入培養(yǎng)皿，先接通電源，啟動(dòng)真空抽氣泵抽氣不少于5min，使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā)。
6. 調(diào)好流量，轉(zhuǎn)盤(pán)轉(zhuǎn)速，已知采樣器的流量（L/min ），設(shè)定采樣時(shí)間(min)，相乘即采樣量(L)；關(guān)閉真空泵。
7. 檢查每個(gè)培養(yǎng)皿的質(zhì)量，培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿有變質(zhì)、破損或污染的不能使用，放入培養(yǎng)皿，蓋上蓋子后調(diào)節(jié)采樣器縫隙高度。
8. 對(duì)于單向流或逆風(fēng)口，采樣器采樣管口朝向應(yīng)正對(duì)氣流方向，對(duì)于非單向流采樣管口向上，布置采樣點(diǎn)時(shí)，至少應(yīng)離開(kāi)塵粒較集中的回風(fēng)口lm以上。
9. 除百級(jí)區(qū)外，在其他潔凈室采樣時(shí)，要在送風(fēng)口和關(guān)鍵部位各進(jìn)行一次采樣，每個(gè)采樣點(diǎn)只采樣一次。
10. 置采樣口于采樣點(diǎn)后，開(kāi)啟采樣器，采樣時(shí)，測(cè)試人員要站在采樣口的下風(fēng)側(cè)，靜態(tài)測(cè)試時(shí)，室內(nèi)人員不得多于2人。
11. 采樣結(jié)束后取出培養(yǎng)皿，蓋上皿蓋并編號(hào)，注意防止采樣管對(duì)樣本的污染；要用消毒劑噴射罩子的內(nèi)壁和轉(zhuǎn)盤(pán)，將采樣過(guò)程記錄在“潔凈級(jí)別檢測(cè)記錄”上。
12. 全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中30℃~35℃培養(yǎng)48h；每批培養(yǎng)基可選3只培養(yǎng)皿作對(duì)照培養(yǎng)，檢驗(yàn)培養(yǎng)基本身是否污染。
13. 用肉眼直接計(jì)數(shù)，標(biāo)記或菌落計(jì)數(shù)器上點(diǎn)計(jì)，然后用500倍放大鏡檢查，有否遺漏，若平板上有2個(gè)或2個(gè)以上的菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上菌落計(jì)數(shù)。
14. 浮游菌評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)：100級(jí)≤5/m3，萬(wàn)級(jí)≤100/m3，10萬(wàn)級(jí)≤500/m3
15. 微生物檢測(cè)人在“潔凈級(jí)別檢測(cè)記錄”上記錄檢測(cè)數(shù)據(jù)，并交QA部門(mén)主管審批，每個(gè)測(cè)點(diǎn)的浮游菌平均濃度必須低于設(shè)定的潔凈度標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定。
16. 若某測(cè)點(diǎn)的浮游菌平均濃度超過(guò)評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，則必須對(duì)此區(qū)域先行消毒，然后重新取樣兩次，兩次測(cè)試結(jié)果必須合格；否則要向質(zhì)量管理部通報(bào)，并要采取相應(yīng)的措施。

參考：公司GMP文件，參考GB /T16292-1996、GB /T16293-1996、GB /T16294-1996