| 參考價(jià) | ￥520.00-￥1000.00 |
| 規(guī)格 | 100管/96樣 | 1000元 | 15 盒可售 |
| 規(guī)格 | 50管/48樣 | 520元 | 15 盒可售 |
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 產(chǎn)地 | 國(guó)產(chǎn) | 規(guī)格 | 100管/96樣、50管/48樣 |
| 級(jí)別 | 其他 |
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貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 |
AS632141 | 抗壞血酸氧化酶（AAO）測(cè)試盒（比色法） | 100管/96樣 |
AS632141 | 抗壞血酸氧化酶（AAO）測(cè)試盒（比色法） | 50管/48樣 |
注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
AAO是定位于植物細(xì)胞壁的糖蛋白，屬“藍(lán)銅氧化酶”家族。細(xì)胞壁內(nèi)的抗壞血酸和AAO與細(xì)胞壁的代謝和生長(zhǎng)有著密切的聯(lián)系。AAO 氧化 AsA 所形成的 MDHA 可通過(guò)質(zhì)膜上的細(xì)胞色素b還原，該過(guò)程中電子的跨膜運(yùn)輸能夠促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)。
測(cè)定原理：
AAO可直接氧化AsA，通過(guò)測(cè)定AsA的氧化量，可計(jì)算得AAO活力。
實(shí)驗(yàn)中所需儀器及設(shè)備：
低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、可調(diào)式移液器、研缽、冰、蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體20mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入2mL蒸餾水充分溶解。
粗酶液提?。?/p>
按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。16000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測(cè)。
AAO測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到265 nm。
2. 試劑二在25℃水浴鍋中預(yù)熱30 min。
3. 依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL上清液、170μL預(yù)熱的試劑二和10μL試劑三，迅速混勻后在265nm測(cè)定10s和130s光吸收A1和A2，△A =A1-A2。
AAO活性計(jì)算公式：
a.使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
(1). 按蛋白濃度計(jì)算
AAO活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol AsA 為1個(gè)酶活單位。
AAO(nmol/min /mg prot) = △A÷(ε×d）×V反總×109÷(Cpr×V樣)÷T
= 92.4×△A÷Cpr
(2). 按樣本質(zhì)量計(jì)算
AAO活性單位定義：25℃中每克樣本每分鐘氧化1nmol AsA 為1個(gè)酶活單位。
AAO(nmol/min/g 鮮重) = △A÷(ε×d）×V反總×109÷(W×V樣÷V樣總)÷T
= 92.4×△A÷W
ε：AsA在265nm處摩爾吸光系數(shù)為5.42×104 L/mol/cm；d：比色皿光徑（cm），1 cm； V反總：反應(yīng)體系總體積（L），200μL=2×10-4 L；106：1mol=1×106μmol；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL），需要另外測(cè)定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒；W ：樣品質(zhì)量；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積（mL），20μL=0.02 mL；V樣總：提取液體積，1 mL；
T：催化反應(yīng)時(shí)間（min），2min。
b.使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
(1). 按蛋白濃度計(jì)算
AAO活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol AsA 為1個(gè)酶活單位。
AAO(nmol/min /mg prot) = △A÷(ε×d）×V反總×109÷(Cpr×V樣)÷T
=184.8×△A÷Cpr
(2). 按樣本質(zhì)量計(jì)算
AAO活性單位定義：25℃中每克樣本每分鐘氧化1nmol AsA 為1個(gè)酶活單位。
AAO(nmol/min/g 鮮重) = △A÷(ε×d）×V反總×109÷(W×V樣÷V樣總)÷T
= 184.8×△A÷W
ε：AsA在265nm處摩爾吸光系數(shù)為5.42×104 L/mol/cm；d：96孔板光徑（cm），0.5 cm； V反總：反應(yīng)體系總體積（L），200μL=2×10-4 L；106：1mol=1×106μmol；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL），需要另外測(cè)定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒；W ：樣品質(zhì)量；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積（mL），20μL=0.02 mL；V樣總：提取液體積，1 mL；
T：催化反應(yīng)時(shí)間（min），2min。
注意事項(xiàng):
配制好的試劑放在4℃保存，三天內(nèi)使用完。
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