牛血清作為細胞培養(yǎng)原料之一,確保它的無菌性、無支原體,同時還需要保證蛋白含量、滲透壓符合要求。
牛血清中的大部分營養(yǎng)物質是蛋白、多肽等熱敏感物質,只能通過過濾的方式來除菌和除支原體。
牛血清中很多成分,如白蛋白即是營養(yǎng)成分,又能維持血清滲透壓;生長因子,含量微小,但其在細胞生產過程中起著非常重要的作用。因此在整個生產過程中需要盡量避免這些必須成分的損失。同時血清中還有不需要,甚至對細胞生長有害的成分,如纖維蛋白、抗體、脂蛋白等。
牛血清的來源包括胎牛血清、小牛血清、成牛血清。不同來源的血清成分不同,如胎牛血清中無抗體存在,而小牛血清和成牛血清中抗體含量不同,過濾精制工藝稍有差別。
牛血清的制備工藝通常如下:
(1)粗制血清制備
適齡牛取血→離心→-20℃冷凍→化凍→紗布過濾除沉淀,收血清濾液
(2)血清精制除菌
路線1:0.2μm→0.2μm→0.2μm,多級濾芯壓濾
路線2:1μm濾芯→0.65μm濾芯→0.22μm濾芯→0.1μm濾芯,多級壓濾
路線3:0.45μm中空→0.22μm中空→0.1μm中空多級錯流過濾
過濾工藝的選擇,主要依據來源血清的差異、目標物質的保留和雜質的種類。
死端過濾具有設備占地面積小、濾芯更換方便,無濃液殘留的優(yōu)勢,但死端過濾又具有易污堵,通量衰減快的缺點,適合比較干凈的物料。
錯流過濾具有膜面污堵輕,通量衰減慢的優(yōu)勢,同時又有濃液殘留的問題,適合成分復雜的物料的過濾純化。
優(yōu)選PES中空纖維膜進行成分復雜的血清產品過濾,可實現菌體、支原體、大分子蛋白(纖維蛋白、脂蛋白、抗體蛋白)的截留去除。同時PES材質還具有低蛋白吸附,耐強堿清洗的特點,每批過濾后,進行膜清洗的同時進行菌體和內毒素殺滅、去除。
PES材質中空纖維膜具有不同精度,優(yōu)選中空纖維膜精度,還可用于牛(或羊)血清抗體蛋白的截留、血清白蛋白透過,用于抗體蛋白柱層析洗脫液的富集濃縮,提高抗體濃度,減少凍干體積,降低能耗等。
























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