【參數(shù)信息】
英文名稱(chēng)：Cy5 Annexin V；Annexin V-Cy5 conjugate；Annexin V-Cyanine5 conjugate
中文名稱(chēng)：Annexin V-Cy5 標(biāo)記；膜聯(lián)蛋白V-Cy5偶聯(lián)物
檢測(cè)方法：光學(xué)、近紅外熒光
代理類(lèi)別：蛋白
純度：≥95%
儲(chǔ)存條件：-20℃避光干燥
生產(chǎn)廠商：西安強(qiáng)化生物科技
【簡(jiǎn)單概述】
Annexin V是錨定蛋白（Annexin）家族成員之一，是一種鈣離子依賴(lài)性磷脂結(jié)合蛋白，對(duì)PS具有高親和力。
在正常細(xì)胞中，PS主要分布于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)；而在細(xì)胞凋亡早期，PS會(huì)從膜內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到膜外側(cè)，暴露于細(xì)胞表面。
這一現(xiàn)象成為檢測(cè)凋亡的關(guān)鍵標(biāo)志。
Annexin V可通過(guò)與熒光染料（如Cy5）偶聯(lián)形成標(biāo)記探針，實(shí)現(xiàn)對(duì)凋亡細(xì)胞的高靈敏度檢測(cè)。
Cy5是一種花青素類(lèi)熒光染料，其激發(fā)波長(zhǎng)為656 nm，發(fā)射波長(zhǎng)為670 nm，適用于流式細(xì)胞術(shù)和熒光顯微鏡成像。
Cy5 Annexin V是由Annexin V蛋白與Cy5熒光染料通過(guò)共價(jià)偶聯(lián)形成的復(fù)合物。其分子量約為36 kDa，保留了Annexin V對(duì)PS的高親和力及鈣離子依賴(lài)性結(jié)合特性，同時(shí)通過(guò)Cy5的熒光信號(hào)實(shí)現(xiàn)可視化檢測(cè)。
該探針主要用于標(biāo)記凋亡早期細(xì)胞膜外翻的PS，是細(xì)胞凋亡研究中的標(biāo)準(zhǔn)工具之一。
【合成方法】
Cy5.5-膜聯(lián)蛋白 V 的合成可以通過(guò)將膜聯(lián)蛋白 V 與 Cy 的 N-羥基琥珀酰亞胺酯以?xún)煞N不同比例的 Cy：膜聯(lián)蛋白 V和非活性膜聯(lián)蛋白 V進(jìn)行修飾來(lái)獲得。
膜聯(lián)蛋白 V 用 Cy5.5 標(biāo)記可以通過(guò)用含有 Cy5.5 單羥基琥珀酰亞胺酯的溶液激活膜聯(lián)蛋白 V來(lái)完成。
在室溫下孵育反應(yīng)混合物 1 小時(shí)后，通過(guò)在 pH 7.4 的磷酸鹽緩沖鹽水中的 BioGel P6 上雙離心分離，將 Cy5.5-膜聯(lián)蛋白 V 的共價(jià)偶聯(lián)物與未反應(yīng)的 Cy5.5 分離。
用yi蛋白酶處理膜聯(lián)蛋白后，可以評(píng)估熒光猝滅。
使用此程序，活性 Cy-膜聯(lián)蛋白 V 平均每 mol 膜聯(lián)蛋白 V 結(jié)合 1.1 個(gè) Cy 分子。為了合成無(wú)活性的 Cy-膜聯(lián)蛋白，使用高 10 倍比例的膜聯(lián)蛋白 V 以獲得更高程度的氨基修飾。
【相關(guān)試劑】
PE-iFluor 610 串聯(lián)染料
Annexin V-iFluor 555標(biāo)記
Annexin V-iFluor 594標(biāo)記
Buccutite PE-Cy7抗體標(biāo)記試劑盒
ReadiLink iFluor 488抗體標(biāo)記試劑盒
ReadiLink iFluor 680抗體標(biāo)記試劑盒
熒光素-12-dGTP 1 mM Tris 緩沖液 (pH 7.5)
ddCTP [2',3'-Dideoxycytidine-5'-triphosphate
iFluor 647-PEG12-dUTP 1 mM in TE Buffer (pH 7.5)
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