【參數(shù)信息】
英文名稱：AF 647 ConA；Alexa Fluor 647 Concanavalin A
中文名稱：AF 647 刀豆蛋白A；Alexa Fluor 647標(biāo)記刀豆球蛋白A
激發(fā)波長(zhǎng)：650 nm
發(fā)射波長(zhǎng)：668 nm
純度：≥95%
儲(chǔ)存條件：-20℃避光干燥
生產(chǎn)廠商：西安強(qiáng)化生物科技
【簡(jiǎn)單概述】（AF 647 刀豆蛋白A）
AF 647 ConA由遠(yuǎn)紅外熒光染料Alexa Fluor 647與植物凝集素刀豆蛋白A（ConA）通過共價(jià)偶聯(lián)制備而成。
ConA來(lái)源于豆科植物刀豆（Canavalia ensiformis），是一種依賴鈣離子/錳離子的糖結(jié)合蛋白，分子量約為104 kDa，通常以四聚體形式存在。
該探針結(jié)合了ConA對(duì)特定糖基的特異性識(shí)別能力與Alexa Fluor 647的高亮度、光穩(wěn)定性和遠(yuǎn)紅外熒光特性，適用于深層組織成像及低自發(fā)熒光背景的實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景。
基本特性
光學(xué)性能：
激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)：650 nm/668 nm（遠(yuǎn)紅光區(qū)），兼容 633 nm 激光激發(fā)。
高熒光亮度與光穩(wěn)定性：磺酸基團(tuán)增強(qiáng)水溶性和抗淬滅能力，適合長(zhǎng)時(shí)間成像。
低背景干擾：近紅外發(fā)射減少生物樣本自發(fā)熒光，信噪比高。
生物結(jié)合特性：
ConA 可特異性識(shí)別末端 α-D-甘露糖、葡萄糖等糖基，結(jié)合細(xì)胞表面糖蛋白、糖脂或細(xì)胞內(nèi)膜結(jié)構(gòu)。
pH 依賴性聚合：中性/堿性條件下為四聚體（高親和力），酸性條件（pH <5）下解離為二聚體。
【使用AF 647 ConA（Alexa Fluor 647標(biāo)記的刀豆蛋白A）進(jìn)行植物細(xì)胞成像或細(xì)胞壁動(dòng)態(tài)變化分析的過程是什么？】
1. 樣本準(zhǔn)備
對(duì)于植物細(xì)胞，通常需要固定樣本以保持結(jié)構(gòu)完整性。
常用4%多聚甲醛（PFA）或3.7%甲quan溶液在室溫下固定20分鐘，隨后用PBS緩沖液沖洗。
若需觀察細(xì)胞壁動(dòng)態(tài)變化，可跳過固定步驟，直接使用活體樣本，但需確保染色條件不影響細(xì)胞活性。
2. 染色處理
將AF 647 ConA溶解于PBS緩沖液或細(xì)胞培養(yǎng)液中，工作濃度通常為1–10 µg/mL。
將樣本浸入染色液中，室溫孵育15–30分鐘或10–15分鐘。
孵育時(shí)間需優(yōu)化以避免非特異性結(jié)合。
孵育后，用PBS緩沖液沖洗樣本，去除未結(jié)合的ConA。
3. 顯微鏡成像
使用共聚焦顯微鏡進(jìn)行成像，AF 647 ConA的激發(fā)波長(zhǎng)為650 nm，發(fā)射波長(zhǎng)為668 nm。
對(duì)于細(xì)胞壁動(dòng)態(tài)分析，可結(jié)合時(shí)間序列成像記錄熒光信號(hào)變化。
活體成像時(shí)需控制環(huán)境溫度、濕度及CO2濃度以維持細(xì)胞活性。
可與其他熒光染料進(jìn)行多通道成像，但需避免光譜重疊。
4. 動(dòng)態(tài)分析應(yīng)用
AF 647 ConA特異性結(jié)合細(xì)胞表面的甘露糖/葡萄糖殘基，因此可用于追蹤細(xì)胞壁多糖的合成、修飾或內(nèi)吞作用。
例如，在擬南芥根尖生長(zhǎng)過程中，通過連續(xù)成像可分析細(xì)胞壁擴(kuò)展與多糖分布的關(guān)聯(lián)性。
若需區(qū)分細(xì)胞壁與質(zhì)膜，可結(jié)合質(zhì)膜特異性染料或使用質(zhì)壁分離處理。
【相關(guān)試劑】
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