【參數(shù)信息】(pBI121植物表達(dá)載體)
載體用途:植物雙元表達(dá)載體
載體大小:14758bp
原核抗性:(Kanamycin,Kan)
克隆菌株:Top 10, DH5a
報(bào)告基因:?-Glucuronidase (GUS)
啟動(dòng)子:CaMV 35S
復(fù)制子:oriV
終止子:NOS
表達(dá)水平:高
載體拷貝數(shù):低
5'測(cè)序引物:CaMV35S-f (GACGCACAATCCCACTATCC)
3'測(cè)序引物:根據(jù)序列設(shè)計(jì)引物
純度:≥95%
儲(chǔ)存條件:-20℃避光干燥
生產(chǎn)廠商:西安強(qiáng)化生物科技
【簡(jiǎn)單概述】(pBI121植物表達(dá)載體)
pBI121 is a plant dual-expression vector specifically engineered for Agrobacterium-mediated plant gene transformation and expression.
As a standard tool vector in plant molecular biology, it enables the delivery of foreign genes into plant cells to achieve stable expression and functional studies of target genes.
Derived from pB221 and Bin19 vectors, this vector integrates key genetic elements to ensure high efficiency and multifunctionality in plant transformation processes.
pBI121是一種植物雙元表達(dá)載體,專為農(nóng)桿菌介導(dǎo)的植物基因轉(zhuǎn)化和表達(dá)設(shè)計(jì)。
它屬于植物分子生物學(xué)中的標(biāo)準(zhǔn)工具載體,用于將外源基因?qū)胫参锛?xì)胞,實(shí)現(xiàn)目標(biāo)基因的穩(wěn)定表達(dá)和功能研究。
該載體源自pB221和Bin19載體,通過(guò)整合關(guān)鍵遺傳元件,使其在植物轉(zhuǎn)化中高效且多功能。
【作用機(jī)制】
(1) 基因克隆階段:目標(biāo)基因插入載體
多克隆位點(diǎn)(MCS)利用:載體包含多個(gè)限制性內(nèi)切酶位點(diǎn),允許研究人員將目標(biāo)基因插入T-DNA區(qū)域。
克隆與擴(kuò)增:重組載體首先轉(zhuǎn)化至大腸桿菌,在含有Kan的LB培養(yǎng)基中擴(kuò)增。抗性基因(NptII)提供篩選壓力,只有成功轉(zhuǎn)化的細(xì)菌才能生長(zhǎng)。
(2) 農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化階段:T-DNA轉(zhuǎn)移至植物細(xì)胞
農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化:擴(kuò)增后的載體從大腸桿菌提取,并轉(zhuǎn)化至農(nóng)桿菌。農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒系統(tǒng)與pBI121的Ter元件(來(lái)自Ti質(zhì)粒)協(xié)同,輔助T-DNA的加工和轉(zhuǎn)移。
T-DNA轉(zhuǎn)移機(jī)制:農(nóng)桿菌感染植物組織時(shí),其Vir蛋白激活,將T-DNA從pBI121切割并包裝成T復(fù)合物。T-DNA包含目標(biāo)基因、報(bào)告基因和抗性基因,通過(guò)農(nóng)桿菌的IV型分泌系統(tǒng)轉(zhuǎn)入植物細(xì)胞核。
(3) 植物細(xì)胞內(nèi)表達(dá)階段:?jiǎn)?dòng)子驅(qū)動(dòng)基因表達(dá)
轉(zhuǎn)錄啟動(dòng):整合后,CaMV 35S啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)目標(biāo)基因的轉(zhuǎn)錄。該啟動(dòng)子在多數(shù)植物細(xì)胞中活性高,不受組織特異性限制,確保基因廣泛且持續(xù)表達(dá)。
轉(zhuǎn)錄終止與穩(wěn)定性:NOS終止子確保mRNA正確終止和穩(wěn)定,防止異常轉(zhuǎn)錄。這提升表達(dá)效率,減少背景噪音。表達(dá)產(chǎn)物可在植物細(xì)胞中積累,用于功能研究或蛋白生產(chǎn)。
(4) 篩選與檢測(cè)機(jī)制:報(bào)告系統(tǒng)和抗性篩選
抗性篩選:Kan抗性基因(NptII)允許在轉(zhuǎn)化后使用抗生素篩選轉(zhuǎn)基因植物。只有整合了載體的細(xì)胞才能存活,非轉(zhuǎn)化細(xì)胞死亡。這提供高效的選擇壓力,簡(jiǎn)化轉(zhuǎn)基因植株鑒定。
報(bào)告基因檢測(cè):
GUS系統(tǒng):標(biāo)準(zhǔn)pBI121中,β-葡萄糖苷酶報(bào)告基因可通過(guò)熒光測(cè)定或組織化學(xué)染色檢測(cè)。GUS在植物細(xì)胞中無(wú)內(nèi)源活性,敏感度高,允許定量和定位分析。
EGFP系統(tǒng):在pBI121-EGFP中,EGFP熒光蛋白提供實(shí)時(shí)、非侵入性檢測(cè)。熒光顯微鏡可直接觀察表達(dá)位置和強(qiáng)度,適用于活體監(jiān)測(cè)。支持鎳柱親和層析純化目標(biāo)蛋白,便于下游分析。
其他檢測(cè):酶切鑒定和PCR用于驗(yàn)證載體構(gòu)建和轉(zhuǎn)化成功。
(5) 整體機(jī)制優(yōu)勢(shì)與應(yīng)用
高效性與穩(wěn)定性:pBI121的雙元設(shè)計(jì)確保T-DNA高效轉(zhuǎn)移和穩(wěn)定整合,轉(zhuǎn)化率較高。載體在宿主細(xì)胞中表達(dá)穩(wěn)定,支持組成型或誘導(dǎo)型表達(dá)研究。
【應(yīng)用領(lǐng)域】
基因功能研究:通過(guò)過(guò)量表達(dá)或異源表達(dá)目的基因,研究該基因在植物中的功能。
報(bào)告基因分析:利用其固有的GUS報(bào)告系統(tǒng),或替換MCS中的GUS基因?yàn)槠渌麍?bào)告基因,來(lái)研究啟動(dòng)子的活性和表達(dá)模式。
植物遺傳轉(zhuǎn)化:作為基礎(chǔ)載體,應(yīng)用于多種植物的穩(wěn)定遺傳轉(zhuǎn)化和突變體創(chuàng)制。
載體改造的骨架:許多新型植物表達(dá)載體以pBI121為骨架進(jìn)行開(kāi)發(fā)。
【相關(guān)試劑】
pBI121 Plant Expression Vector植物表達(dá)載體
pBI221 Plant Expression Vector植物表達(dá)載體
pBI221-EGFP Plant Expression Vector植物表達(dá)載體
pCAMBIA1300 Plant Expression Vector植物表達(dá)載體
pCAMBIA1301 Plant Expression Vector植物表達(dá)載體
pCAMBIA1305.1 Plant Expression Vector植物表達(dá)載體
pCAMBIA1305.2 Plant Expression Vector植物表達(dá)載體
pCAMBIA2300 Plant Expression Vector植物表達(dá)載體
pCAMBIA2301 Plant Expression Vector植物表達(dá)載體
DH5α Chemically Competent Cell大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
MSU440 Chemically Competent Cell農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
C58C1 Chemically Competent Cell農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
以上資料由西安強(qiáng)化生物科技有限公司xxn整理!
本試劑僅適用于科研實(shí)驗(yàn),敬請(qǐng)知悉。












采購(gòu)中心
