【參數(shù)信息】

英文名稱：AF488 PEG4 DBCO

中文名稱：AF488四聚乙二醇二苯并環(huán)辛炔基

Ex (nm)：499

Em (nm)：520

狀態(tài)：綠色固體

溶解性：易溶于DMSO

純度：≥95%

儲(chǔ)存條件：-20℃避光干燥

生產(chǎn)廠商：西安強(qiáng)化生物科技

【簡(jiǎn)單概述】（AF488四聚乙二醇二苯并環(huán)辛炔基）

Alexa Fluor488 PEG4 DBCO是一種綠色熒光染料偶聯(lián)物，含有DBCO反應(yīng)基團(tuán)，可通過銅自由點(diǎn)擊化學(xué)（SPAAC）與含疊氮基的生物分子偶聯(lián)。

PEG4間隔鏈提高了水溶性和生物相容性,減少非特異性結(jié)合。

該化合物適用于蛋白質(zhì)、抗體及核酸的標(biāo)記,適合細(xì)胞標(biāo)記、免疫檢測(cè)和多色熒光實(shí)驗(yàn)。

Alexa Fluor488 PEG4 DBCO is a green fluorescent dye conjugate containing a DBCO reactive group.

It can be coupled with azide-containing biomolecules via copper-free click chemistry (SPAAC).

The PEG4 spacer chain enhances water solubility and biocompatibility while reducing nonspecific binding.

This compound is suitable for labeling proteins, antibodies, and nucleic acids, particularly ideal for cell labeling, immunoassays, and multicolor fluorescence experiments.

反應(yīng)原理

DBCO基團(tuán)的作用：DBCO（二苯并環(huán)辛炔）可通過應(yīng)變促進(jìn)的疊氮-炔環(huán)加成反應(yīng)與疊氮基團(tuán)特異性結(jié)合，形成穩(wěn)定的三唑鍵。

該反應(yīng)無(wú)需銅催化劑，條件溫和且生物相容性高，適用于活細(xì)胞標(biāo)記。

PEG4間隔臂的作用：增強(qiáng)水溶性，減少空間位阻，提高標(biāo)記效率并降低免疫原性。

AF488熒光基團(tuán)：提供綠色熒光（激發(fā)/發(fā)射峰約495/519 nm），適用于488 nm激光的熒光顯微鏡或流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)。

操作步驟

1. 疊氮化修飾靶分子（預(yù)活化）

蛋白質(zhì)疊氮化：使用含疊氮基團(tuán)的試劑修飾蛋白質(zhì)的伯胺基（如賴氨酸殘基），反應(yīng)需在pH 8.0–9.0的緩沖液中進(jìn)行。

細(xì)胞表面疊氮化：通過代謝工程將疊氮基團(tuán)引入細(xì)胞表面糖鏈。

純化：移除未反應(yīng)的疊氮試劑，避免干擾后續(xù)點(diǎn)擊反應(yīng)。

2. AF488 PEG4 DBCO標(biāo)記反應(yīng)

反應(yīng)條件：

緩沖液：中性至弱堿性緩沖液，避免含游離胺或銨鹽的體系。

溫度與時(shí)間：室溫（25°C）反應(yīng)30–60分鐘，或4°C過夜。

摩爾比：推薦DBCO : 疊氮化物 = 1.5–2 : 1。

操作示例：

將AF488 PEG4 DBCO溶于無(wú)水DMSO配成母液。

按比例加入疊氮化靶分子溶液，渦旋混勻。

室溫避光孵育30–60分鐘，輕柔振蕩。

3. 純化偶聯(lián)產(chǎn)物

方法：

尺寸排阻層析：使用Sephadex G-25柱去除游離染料及小分子雜質(zhì)。

磁珠分離：若使用DBCO磁珠，可通過磁性分離并洗滌。

驗(yàn)證：通過熒光光譜、HPLC或質(zhì)譜確認(rèn)標(biāo)記效率及產(chǎn)物純度。

4. 儲(chǔ)存與使用

短期：4°C避光保存于緩沖液中，添加穩(wěn)定劑。

長(zhǎng)期：分裝凍存于-20°C，避免反復(fù)凍融。

應(yīng)用：標(biāo)記后的分子可直接用于成像、流式細(xì)胞術(shù)或功能研究。

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