【??參數(shù)信息】
英文名稱(chēng):DQ-BSA-Green;Green BSA Lysozyme Assay Kit
中文名稱(chēng):溶酶體活性檢測(cè)綠色熒光探針
狀態(tài):凍干粉
溶解性:易溶于水、PBS等緩沖液,不溶于有機(jī)溶劑(如乙醇、丙酮)
運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
純度:≥95%
儲(chǔ)存條件:-20℃避光干燥
生產(chǎn)廠商:西安強(qiáng)化生物科技
【簡(jiǎn)單概述】(溶酶體活性檢測(cè)綠色熒光探針)
DQ-BSA-Green 溶酶體活性檢測(cè)綠色熒光探針是基于牛血清白蛋白(BSA)的熒光溶酶體活性分子探針,使用高濃度的熒光探針對(duì)BSA進(jìn)行標(biāo)記,標(biāo)記后的BSA分子由于高濃度的熒光探針存在高度的熒光自抑制現(xiàn)象。
因而本底熒光強(qiáng)度很低,DQ-BSA-Green在正常的活性溶酶體中降解會(huì)產(chǎn)生BSA蛋白質(zhì)片段,使熒光分子濃度變小從而解除染料的自抑制效果,在細(xì)胞中發(fā)出明亮的熒光。
功能失活的溶酶體則無(wú)法降解BSA蛋白,高濃度熒光分子間的自抑作用使得功能失活的溶酶體沒(méi)有熒光。
使用DQ-BSA-Green對(duì)溶酶體染色更加直觀,可直接進(jìn)行活細(xì)胞成像,免除了制片、染色或者細(xì)胞裂解、離心檢測(cè)活性等復(fù)雜操作。
只需在檢測(cè)前6小時(shí)將染料加入活細(xì)胞中進(jìn)行染色,6小時(shí)后直接成像即可。
DQ-BSA-Green 染料可被內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞,水解前具有極低的熒光背景,到達(dá)溶酶體水解后能在溶酶體發(fā)出特異且明亮的熒光。
同時(shí),染料的熒光光譜峰寬較小,兼容其他蛋白或者波長(zhǎng)的染料進(jìn)行共染色;染料具有較好的光熱穩(wěn)定性和化學(xué)穩(wěn)定性,在共聚焦顯微鏡下可穩(wěn)定成像較長(zhǎng)時(shí)間,相較于lysotrackor在成像過(guò)程較穩(wěn)定。
【使用方法】
(1)凍干粉母液配制
5000rpm 離心以收集可能懸浮于管壁的粉末,于通風(fēng)棚等無(wú)菌環(huán)境中,向每支染料加入1.0mL緩沖溶液,顛倒混勻即可快速溶解,復(fù)溶后的母溶液為1 mg/mL。
(2)細(xì)胞染色
溶解后的儲(chǔ)存液可以10ug/mL 的終濃度直接加入培養(yǎng)中的活細(xì)胞中。正常培養(yǎng) 6 小時(shí)-12 小時(shí)后,更換掉含有染料的培養(yǎng)液即可直接顯微鏡觀察染色情況。
推薦溶酶體活性相關(guān)的處理應(yīng)該早于染料進(jìn)行,即染料加入前,應(yīng)該保證溶酶體功能已經(jīng)被破壞,否則在染色期間仍具有活性的溶酶體還能降解 DQ-BSA-Green,導(dǎo)致部分顯色。
(3)細(xì)胞成像
染色后的細(xì)胞可直接在熒光顯微鏡下進(jìn)行活細(xì)胞觀察,或者固定后觀察均可,同時(shí),本探針還可以兼容免疫熒光或者內(nèi)源熒光蛋白標(biāo)記過(guò)程,可進(jìn)行多色成像。
使用488激光器或者近似波長(zhǎng)激發(fā),495 波長(zhǎng)發(fā)射光收集信號(hào)。
【相關(guān)試劑】
LysoBrite 溶酶體藍(lán)色熒光探針
LysoBrite 溶酶體綠色熒光探針
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二氫乙錠(DHE,超氧化物陰離子熒光探針)CAS 38483-26-0
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