標(biāo)題：5-Cyano-2,3-ditolyl Tetrazolium Chloride ，CTC氧化還原染料

【??參數(shù)信息】

英文名稱：5-Cyano-2,3-ditolyl Tetrazolium Chloride (CTC)

中文名稱：5-氰基-2，3-二-（P-芐基-四唑氯化物）

CAS NO：90217-02-0

分子式：C16H14ClN5

分子量：311.77 g/mol

外觀：白色或淺橙色結(jié)晶性粉末

溶解性：溶于水

純度：≥95%

儲(chǔ)存條件：-20℃避光干燥

生產(chǎn)廠商：西安強(qiáng)化生物科技

【簡(jiǎn)單概述】

5-Cyano-2,3-ditolyl Tetrazolium Chloride (CTC) ，是一種靈敏的氧化還原染料，CTC氧化還原染料主要用來檢測(cè)微生物的代謝活性。

這一膜滲透性的染料能迅速被健康的活細(xì)胞攝取，通過呼吸活動(dòng)中的電子傳遞被還原成一種不溶于水、發(fā)紅色熒光的甲臜結(jié)晶—CTC甲臜。

而不呼吸或呼吸能力很弱的細(xì)胞不能或僅還原少的CTC，不產(chǎn)生或產(chǎn)生弱的熒光產(chǎn)物，因此，提供一種半定量的方法來評(píng)估健康&不健康細(xì)胞。

CTC本身溶于水且在水溶液中無熒光。

CTC甲臜雖在低粘度的液體中無熒光，但在高粘度的液體和固體狀態(tài)下發(fā)紅色熒光。

因此，通過熒光顯微鏡計(jì)數(shù)或流式細(xì)胞術(shù)分析，能夠研究具呼吸活性的細(xì)胞。

CTC甲臜的激發(fā)波長(zhǎng)為430nm或480nm，發(fā)射波長(zhǎng)為630nm。

【實(shí)驗(yàn)步驟（綜合多個(gè)應(yīng)用場(chǎng)景）】

通用流程（微生物代謝活性檢測(cè)）

（一）溶液配制：

常用濃度：2.5–5 mM，或 1% (v/v) 水溶液。

母液制備：如，將5 mg CTC溶于0.33 ml蒸餾水（約15 mg/ml），分裝冷凍保存。

（二）樣品處理：

浮游微生物（水樣）：

取2 ml樣品，加入200 μl 50 mM CTC溶液（終濃度約4.5 mM），室溫避光孵育 1–4小時(shí)。

或過濾至0.2 μm黑色聚碳酸酯膜，加入含CTC的R2A培養(yǎng)基（1:2稀釋），孵育后沖洗。

生物膜/組織樣品：

如鰓組織：100 μl PBS中加入1 μl CTC母液，4℃避光孵育 2–4小時(shí)，PBS沖洗3–5次。

生物膜載玻片：用4 mM CTC礦物鹽培養(yǎng)基孵育1小時(shí)，DAPI復(fù)染。

（三）孵育條件：

時(shí)間：0.5–5小時(shí)，常用1小時(shí)。

溫度：室溫

或37℃，部分需避光振蕩。

注意事項(xiàng)：

避免高濃度磷酸鹽（抑制還原反應(yīng)）。

低代謝樣品需延長(zhǎng)孵育時(shí)間。

四（s）檢測(cè)與觀察：

顯微鏡觀察：

激發(fā)光： 藍(lán)光濾片（400–480 nm），或480 nm激光（流式細(xì)胞術(shù)）。

發(fā)射光：>590 nm紅光，使用羅丹明濾片或590 nm屏障濾片。

結(jié)果判讀：

活細(xì)胞/高代謝細(xì)胞：還原CTC為紅色熒光甲臜結(jié)晶（CTF）。

死細(xì)胞/低代謝細(xì)胞：無熒光或弱熒光。

【相關(guān)試劑】

Cy3 生物su偶聯(lián)物

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