【????數(shù)信息】
英文名稱：5(6)-FITC DA
中文名稱：5(6)-FITC DA熒光酯酶底物
CAS NO：871487-69-3
分子式：C26H19NO7S
分子量：489.49656
狀態(tài)：白色固體
純度：≥95%
儲(chǔ)存條件：-20℃避光干燥
生產(chǎn)廠商：西安強(qiáng)化生物科技
【簡(jiǎn)單概述】
5(6)-FITC DA熒光酯酶底物是一種細(xì)胞可滲透的熒光酯酶底物，通過胞內(nèi)酯酶水解激活熒光，用于檢測(cè)細(xì)胞活力和酶活性。
其核心機(jī)制是乙?；馍蓭ж?fù)電荷的羧基熒光素，實(shí)現(xiàn)熒光信號(hào)滯留與定量分析。
功能機(jī)制
（1）作為熒光酯酶底物
細(xì)胞滲透性：
5(6)-FITC DA 可穿透細(xì)胞膜，被細(xì)胞內(nèi) 酯酶（esterases）水解，脫去乙?；蔁晒猱a(chǎn)物 5(6)-FITC。
熒光激活：
水解前：無(wú)熒光或弱熒光。
水解后：釋放強(qiáng)綠色熒光（激發(fā)/發(fā)射峰值約 492–504 nm / 518–529 nm）。
雙重檢測(cè)功能：
酶活性標(biāo)志：熒光強(qiáng)度反映細(xì)胞內(nèi)酯酶活性。
細(xì)胞膜完整性標(biāo)志：熒光產(chǎn)物需完整細(xì)胞膜才能滯留于細(xì)胞內(nèi)；若膜破損，熒光會(huì)泄漏。
（2）作為蛋白標(biāo)記前體
水解生成的 5(6)-FITC 是 氨基反應(yīng)性熒光標(biāo)簽，其異硫氰酸酯基（-N=C=S）可與蛋白質(zhì)的氨基（如賴氨酸側(cè)鏈）共價(jià)結(jié)合，形成穩(wěn)定熒光標(biāo)記。
【實(shí)驗(yàn)步驟（基于類似熒光酯酶底物操作）】
（一）工作液配制
儲(chǔ)存液配制：
用適當(dāng)溶劑（如DMSO或無(wú)水乙醇）溶解粉末，配制成10–50 mM儲(chǔ)存液。
工作液稀釋：
使用前用無(wú)血清培養(yǎng)基或緩沖液（如PBS）稀釋儲(chǔ)存液至終濃度1–10 μM（根據(jù)細(xì)胞類型優(yōu)化）。
注意：避免含胺緩沖液（如RPMI），防止干擾反應(yīng)。
（二）細(xì)胞標(biāo)記與孵育
步驟：
去除細(xì)胞培養(yǎng)液，用預(yù)熱的PBS清洗細(xì)胞1–2次。
加入工作液覆蓋細(xì)胞，37°C避光孵育15–30分鐘。
離心（400 g, 3–4分鐘），棄上清（貼壁細(xì)胞可直接吸除）。
用PBS清洗細(xì)胞2次，去除未進(jìn)入細(xì)胞的染料。
（三）檢測(cè)方法
熒光顯微鏡：
使用FITC濾光片觀察綠色熒光。
流式細(xì)胞術(shù)：
用PBS或無(wú)血清培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，在FL1/BL1通道檢測(cè)熒光。
酶標(biāo)儀：
設(shè)置激發(fā)波長(zhǎng)490–497 nm，發(fā)射波長(zhǎng)515–520 nm，定量熒光強(qiáng)度。
（四）可選步驟（固定與透化）
若需后續(xù)抗體標(biāo)記：
用3.7%多聚甲醛室溫固定15分鐘。
冰丙酮透化10分鐘。
PBS清洗后繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。
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