【??參數(shù)信息】
英文名稱：DH5α Electrocompetent cell 大腸桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞
中文名稱：DH5α大腸桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞
適用性：適用于懸浮細胞、貼壁細胞。
運輸：干冰運輸
純度：≥95%
儲存條件：-20℃避光干燥
生產(chǎn)廠商：西安強化生物科技
【簡單概述】
DH5α大腸桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞是一種用于電擊轉(zhuǎn)化的大腸桿菌菌株，通過特殊工藝處理后，處于“感受態(tài)”。
（感受態(tài)即細胞膜通透性暫時改變，允許外源DNA高效進入的狀態(tài)）。
主要特點包括：
適用性：僅適用于電擊轉(zhuǎn)化，不能用于熱激轉(zhuǎn)化。
基因型優(yōu)勢：
recA1 突變：抑制同源重組，保證外源DNA穩(wěn)定性。
endA1 突變：消除核酸內(nèi)切酶活性，提高質(zhì)粒DNA純度。
lacZΔM15 缺失：支持藍白斑篩選。
甲基化保護突變（如 mcrA、mcrBC、mrr-、hsdRMS）：防止甲基化DNA被降解，適合克隆甲基化修飾的DNA。
與其他感受態(tài)細胞的區(qū)別
與化學感受態(tài)細胞的區(qū)別：
電轉(zhuǎn)感受態(tài)僅支持電穿孔法，而化學感受態(tài)需Ca2?處理并通過熱激轉(zhuǎn)化。
電轉(zhuǎn)法效率通常比化學法高 10–100倍。
與普通DH5α菌株的區(qū)別：
電轉(zhuǎn)菌株添加了增強電轉(zhuǎn)效率的突變。
【使用方法】
一、實驗前準備
材料與試劑
DH5α電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞
預冷的0.1 cm或0.2 cm電擊杯
無菌DNA樣品
無菌SOC或LB培養(yǎng)基
含抗生素的LB瓊脂平板
冰浴設備、無菌吸頭、離心管等
安全操作
穿實驗服并戴一次性手套。
所有操作需在無菌條件下進行。
二、實驗步驟
1. 電擊杯預處理
從儲存液中取出電擊杯和杯蓋，倒置在干凈吸水紙上5分鐘瀝干水分，再正置5分鐘使乙醇揮發(fā)。
立即插入冰中預冷5分鐘，確保杯頂離冰面0.5 cm以便蓋蓋。
2. 感受態(tài)細胞解凍
從-80℃取出感受態(tài)細胞，插入冰中靜置5分鐘至融化（避免反復凍融）。
3. DNA與細胞混合
將DNA（≤5 μl）加入50-100 μl感受態(tài)細胞中，輕柔吹打混勻（避免氣泡）。
注意：
若DNA含高鹽離子（如連接產(chǎn)物），需純化或乙醇沉淀后重懸于ddH?O。
使用剪去的吸頭（減少剪切力）混勻。
4. 電擊轉(zhuǎn)化
將混合液快速轉(zhuǎn)移至預冷的電擊杯中，確保液面平整無氣泡。
設置電擊參數(shù)（典型值）：
電壓：2.4–2.5 kV
電阻：200 Ω
電容：25 μF
啟動電擊程序（電擊時間由儀器自動計算）。
5. 復蘇培養(yǎng)
電擊后立即加入950 μl預熱的SOC或LB培養(yǎng)基（無抗生素）。
輕柔吹吸混勻，轉(zhuǎn)移至無菌離心管。
37℃搖床（150-250 rpm）培養(yǎng)45-60分鐘，使細胞恢復。
6. 涂板與培養(yǎng)
取100-200 μl菌液涂布于含抗生素的LB平板上（根據(jù)平板大小調(diào)整用量）：
90 mm平板：涂布100 μl
55 mm平板：涂布50 μl
連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化建議：離心濃縮菌液，棄大部分上清，取100-200 μl涂布。
靜置至液體吸收，倒置平板，37℃培養(yǎng)12-18小時。
【相關試劑】
FITC-Con A FITC
Auramine O金胺O
Kanamycin Sulfate
Ziehl-Neelsen Method
Rifampicin, USP Grade
Ampicillin, Sodium Salt
Carbenicillin,Disodium Sal
TG1 Electrocompetent cell
SURE Electrocompetent cell
BJ5183 Electrocompetent cell
DH10B Electrocompetent cell
XL1-Blue Electrocompetent cell
BJ5183-AD-1 Electrocompetent cell
Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit
Annexin V-APC/7-AAD Apoptosis Detection Kit
Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit
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本試劑僅適用于科研實驗，敬請知悉。
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