【??參數(shù)信息】
英文名稱：MSU440 Electrocompetent Cell 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞
中文名稱：MSU440農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞
形態(tài)：經(jīng)特殊工藝制備成電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞，適用于大質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化。
規(guī)格：通常為 50μl/支，包裝形式包括10×50μl或50×50μl。
運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸。
純度：≥95%
儲(chǔ)存條件：-20℃避光干燥
生產(chǎn)廠商：西安強(qiáng)化生物科技
【簡(jiǎn)單概述】
MSU440農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞是一種應(yīng)用于農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，屬于發(fā)根農(nóng)桿菌菌株。
其核心特征包括：
菌株特性：
革蘭氏陰性土壤細(xì)菌，具有廣泛的宿主范圍（可感染大多數(shù)雙子葉植物、部分單子葉植物及裸子植物，如玉米、茶樹、煙草等）。
天然攜帶 農(nóng)桿堿型Ri質(zhì)粒（agropine-type Ri plasmid），賦予其Str。
基因型明確為 Agrobacterium rhizogenes (Str) MSU440 Ri 。
【使用方法】
（1）將0.1 cm電擊杯和杯蓋從儲(chǔ)存液中拿出倒置于干凈吸水紙上5min，待其瀝干水分，正置5min，使乙醇充分揮發(fā)干凈，立即插入冰中，壓實(shí)冰面，電極杯頂離冰面0.5cm以方便蓋上杯蓋，冰中靜置5min使其充分降溫。
（2）取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞插入冰中5min，待其融化。
（3）往50μl感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入0.01~1μg（體積不大于6μl）質(zhì)粒DNA，用手打管底使其混勻，立即插入冰中。用槍輕輕吹打混勻感受態(tài)細(xì)胞-質(zhì)粒之后快速轉(zhuǎn)移到電擊杯中，蓋上杯蓋，空管保留待用。
（4）啟動(dòng)電轉(zhuǎn)儀，設(shè)置參數(shù)：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V，將電擊杯從冰中取出，吸水紙吸干外表面水分，快速放入電轉(zhuǎn)槽中，啟動(dòng)電擊，電擊完成快速插入冰中。
（5）加入1ml無抗生素的TY并轉(zhuǎn)移到感受態(tài)空管中，于28℃振蕩培養(yǎng)2~3h。
（6）6,000rpm離心1min，留取100ul左右上清，之后用槍輕輕吹打重懸菌體。之后加到含相應(yīng)抗生素的TY平板上，用無菌玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開。室溫正置10 min，待液體被吸收后，倒置平板，28℃培養(yǎng)2-3天。
【注意事項(xiàng)】
（1）感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-80℃，不可反復(fù)凍融和放置時(shí)間過長(zhǎng)，以免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
（2）整個(gè)轉(zhuǎn)化操作，嚴(yán)格根據(jù)相應(yīng)溫度及無菌條件要求進(jìn)行。
（3）加入質(zhì)粒的體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10。質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機(jī)物污染，會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)化效率急劇下降。質(zhì)粒增大一倍，轉(zhuǎn)化效率下降一個(gè)數(shù)量級(jí)。
（4）為確保轉(zhuǎn)化效率，整個(gè)操作過程應(yīng)盡量輕柔，并保持低溫。
（5）電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞中不可混入氣泡，轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少最終涂板用量。
（6）平板上克隆密度過大時(shí)，由于營(yíng)養(yǎng)不足，克隆生長(zhǎng)變慢，菌落變小。為獲得大菌落，應(yīng)減少質(zhì)粒用量。
（7）MSU440具抗性，不可用于具抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化。
（8）為了保證轉(zhuǎn)化效率，發(fā)根農(nóng)桿菌的培養(yǎng)務(wù)必使用TY培養(yǎng)基。
（9）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
【相關(guān)試劑】
FITC-Con A FITC
Cy7 tetrazine Cy7四嗪
Cy5.5 tetrazine Cy5.5四嗪
Texas Red TCO 單一異構(gòu)體
Cy3B azide Cy3B 疊氮化物
DBCO-Cy5 熒光染料DBCO-Cy5
Calcium Ionophore A23187鈣離子載體
Ionomycin, Free Base離子霉素（游離酸）
Ionomycin, Free Base離子霉素（游離酸）
ER-TrackerTM Blue-White DPX, for live-cell imaging
Cyanine 7 amine [equivalent to Cy7 amine] Cy7 胺
ER-TrackerTM Blue-White DPX, for live-cell imaging
以上資料由西安強(qiáng)化生物科技有限公司xxn整理！
本試劑僅適用于科研實(shí)驗(yàn)，敬請(qǐng)知悉。
采購(gòu)中心
