【??參數(shù)信息】

英文名稱：Benzonase Nuclease

中文名稱：quan能核酸酶（帶Strep標(biāo)簽）

CAS NO：9025-65-4

酶活性值：≥250 U/μL

比活性值：≥1×106U/mg蛋白

蛋白酶：未檢出

合適pH：8.0（工作范圍pH6-10）

合適溫度：37℃（工作范圍0-42℃）

活性單位定義：在37℃，pH8.0反應(yīng)條件，30min內(nèi)使△A260值降低1.0所用的酶量定義為一個(gè)活性單位（U）。

純度：≥95%

儲(chǔ)存條件：-20℃避光干燥

生產(chǎn)廠商：西安強(qiáng)化生物科技

【簡(jiǎn)單概述】

Benzonase，一種非特異性核酸內(nèi)切酶，由兩個(gè)一樣的亞基構(gòu)成，每個(gè)亞基大約30kDa，含有245個(gè)氨基酸和兩個(gè)必需的二硫鍵。

可以切割和降解各種形式的DNA和RNA（單鏈，雙鏈，線性，環(huán)狀，或超螺旋形式），生成含有5’-磷酸末端的3-5個(gè)寡核苷酸殘基片段，并且在很多種操作條件下有效。

對(duì)核酸堿基序列無(wú)特異性要求，可在鏈內(nèi)任意核苷酸間進(jìn)行切割，廣泛用于去除生物制品中的核酸。

本品經(jīng)基因工程改造的原核表達(dá)純化所得，攜帶Strep-tag II標(biāo)簽（Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys），核酸消化后可用牢固結(jié)合Strep-tag II的磁珠或樹脂來(lái)去除。

Strep-tag II標(biāo)簽很小，對(duì)酶的結(jié)合和活性基本無(wú)影響。

本品quan能核酸酶（帶Strep標(biāo)簽）能降低蛋白樣本粘度，去除蛋白樣品中核酸的污染，無(wú)蛋白酶活性殘留，核酸酶活性高達(dá)1×106 U/mg蛋白。

本品未經(jīng)特殊的內(nèi)毒素去除處理，適用于常規(guī)的科研應(yīng)用，包括常規(guī)蛋白樣本提取時(shí)核酸污染的去除，2D凝膠電泳蛋白樣本的制備，WB，WB-IP等。

【使用方法】

具體樣本操作步驟

（一）細(xì)胞樣本（貼壁/懸浮細(xì)胞）

裂解液體積：每100萬(wàn)細(xì)胞使用100 μL裂解液（如RIPA）。

酶添加量：

貼壁細(xì)胞：100 μL裂解液 + 1-5 μLquan能核酸酶。

懸浮細(xì)胞：同貼壁細(xì)胞或按1 mL裂解液 + 1-2 μL 酶。

步驟：

貼壁細(xì)胞：棄培養(yǎng)基→PBS洗滌→加含酶的裂解液。

懸浮細(xì)胞：離心收集沉淀→重懸于含酶的裂解液。

室溫孵育 15-30分鐘（冰上可延長(zhǎng)至30分鐘）。

12,000-14,000 ×g 離心 10-30分鐘，取上清用于下游實(shí)驗(yàn)。

（二）組織樣本

組織量：30-100 mg。

裂解液體積：100-200 μL（如RIPA）。

酶添加量：每100-200 μL裂解液加 0.5-10 μL 酶（多數(shù)推薦1-5 μL）。

步驟：

充分研磨組織。

加入裂解液和酶，混勻。

室溫或冰上孵育 30分鐘 。

12,000 ×g 離心 10-30分鐘，取上清。

（三）細(xì)菌樣本（如大腸桿菌）

菌體處理：離心收集菌體→重懸于裂解液（體積比為1:10）。

酶添加量：每1 mL裂解液加 1-5 μL 酶。

步驟：

裂解菌體（機(jī)械/化學(xué)法）。

加酶后室溫孵育 30分鐘。

12,000 rpm 離心 10-30分鐘，取上清。

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