【??參數(shù)信息】
英文名稱:Guanosine 5'-Diphosphoglucose (GDPG) Sodium Salt
中文名稱:鳥苷5’-二磷酸葡萄糖鈉鹽
常稱作:GDP-葡萄糖
CAS NO:103301-72-0
分子式:C16H26N5NaO16P2
分子量:629.34
狀態(tài):白色至類白色粉末
溶解性:溶于水
純度:≥95%
儲(chǔ)存條件:-20℃避光干燥
生產(chǎn)廠商:西安強(qiáng)化生物科技
【簡(jiǎn)單概述】
鳥苷5’-二磷酸葡萄糖(Guanosine 5'-Diphosphoglucose),常稱為GDP-葡萄糖(GDPG),是一種核苷酸糖類供體底物,用于葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的糖基化反應(yīng)。
GDPG為酶法可得的葡萄糖殘基提供一種來源,從而將其連接到大量的多糖結(jié)構(gòu)上。
【實(shí)驗(yàn)操作步驟】
(一)溶液配制
溶解方法
使用無菌水配制儲(chǔ)存液,推薦濃度50 mg/mL。
過濾除菌:用0.22 μm濾膜過濾后使用。
儲(chǔ)存液分裝
分裝成單次用量,避免反復(fù)凍融。
現(xiàn)配現(xiàn)用;若需保存,-20℃密封可穩(wěn)定1個(gè)月。
(二)酶促反應(yīng)應(yīng)用(以糖基化反應(yīng)為例)
依據(jù)的酶法合成方案:
底物準(zhǔn)備:將GDPG鈉鹽與其他單糖衍生物按比例混合。
酶反應(yīng)體系:
加入克隆表達(dá)的葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶(如中的"一鍋三酶法")。
反應(yīng)緩沖液:常用Tris-HCl或磷酸鹽緩沖液(pH 7.0–7.5)。
反應(yīng)監(jiān)測(cè):
TLC(薄層色譜) :跟蹤反應(yīng)進(jìn)程。
DNS檢測(cè):測(cè)定還原糖釋放量。
產(chǎn)物純化:
通過陰離子交換色譜分離產(chǎn)物(參考的GDP純化方法)。
(三)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
預(yù)處理要求:非無菌包裝,細(xì)胞實(shí)驗(yàn)前需除菌/去熱原。
操作防護(hù):穿實(shí)驗(yàn)服、戴N95口罩、護(hù)目鏡及一次性手套。
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