【??參數(shù)信息】
英文名稱:CopyCutter Induction Solution誘導(dǎo)液
狀態(tài):液態(tài)溶液
特性:無菌、需避光冷藏,渾濁時(shí)需過濾。
純度:≥95%
儲(chǔ)存條件:-20℃避光干燥
生產(chǎn)廠商:西安強(qiáng)化生物科技
【簡(jiǎn)單概述】
CopyCutter Induction Solution誘導(dǎo)液是一種用于調(diào)控大腸桿菌特定菌株中質(zhì)粒拷貝數(shù)的化學(xué)試劑。
其主要功能是通過誘導(dǎo)基因表達(dá),動(dòng)態(tài)控制質(zhì)粒的復(fù)制水平,從而解決不穩(wěn)定 DNA 序列或毒性基因的克隆難題,并終提高質(zhì)粒產(chǎn)量。
該產(chǎn)品以濃縮液形式提供,經(jīng)無菌過濾處理,可直接加入細(xì)菌培養(yǎng)液中使用。
關(guān)鍵功能優(yōu)勢(shì)
動(dòng)態(tài)調(diào)控拷貝數(shù):
初始低拷貝狀態(tài)利于克隆不穩(wěn)定DNA序列,避免宿主細(xì)胞死亡;誘導(dǎo)后高拷貝狀態(tài)提升質(zhì)粒產(chǎn)量,兼顧穩(wěn)定性。
兼容性廣:適用于多種大腸桿菌菌株及常見載體(pUC、pET型)。
操作便捷:直接按比例(如1:200)加入培養(yǎng)基,無需額外滅菌。
【應(yīng)用場(chǎng)景】
(一)分子克隆與質(zhì)粒制備
困難序列克?。嚎寺∫捉到饣蚨拘曰驎r(shí),先以低拷貝狀態(tài)維持穩(wěn)定性,誘導(dǎo)后高拷貝回收DNA。
高產(chǎn)量質(zhì)粒提?。赫T導(dǎo)4小時(shí)(37℃劇烈震蕩)可使質(zhì)粒拷貝數(shù)提升10倍以上,適用于大規(guī)模質(zhì)粒制備。
甲基化DNA克隆:配合EPI300/EPI400菌株(mcrA、Δmrr-hsdRMS突變),高效克隆甲基化DNA。
(二)特定菌株配套應(yīng)用
EPI400菌株:用于含ColE1/pMB1復(fù)制起點(diǎn)的載體,通過誘導(dǎo)解決毒性基因表達(dá)問題。
EPI300菌株:專為含ori V復(fù)制子的載體設(shè)計(jì),誘導(dǎo)后提高質(zhì)粒產(chǎn)量。
藍(lán)白斑篩選:菌株攜帶lacZΔM15標(biāo)記,支持藍(lán)白斑篩選重組克隆。
(三)操作流程示例
標(biāo)準(zhǔn)誘導(dǎo)步驟:
接種單菌落于含抗生素的LB培養(yǎng)基,37℃震蕩培養(yǎng)過夜。
稀釋菌液至OD600=0.2,加入1X誘導(dǎo)液。
37℃劇烈震蕩(≥200rpm)培養(yǎng)4小時(shí),確保充分通氣。
收獲菌體并提取質(zhì)粒,產(chǎn)量可達(dá)未誘導(dǎo)狀態(tài)的10倍。
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