【??參數(shù)信息】
英文名稱:Crosslinked Allophycocyanin
中文名稱:交聯(lián)別藻藍(lán)蛋白
激光通道:633-647nm
Ex /Em:651/660nm
濾片設(shè)置:Cy5
摩爾吸光系數(shù):700,000 (cm-1M-1)
光量子產(chǎn)率:0.68
分子量:~105,000
外觀:溶液
純度:≥95%
【簡(jiǎn)單概述】
交聯(lián)別藻藍(lán)蛋白是通過(guò)化學(xué)交聯(lián)技術(shù)對(duì)天然別藻藍(lán)蛋白(Allophycocyanin, APC)進(jìn)行修飾的產(chǎn)物。
天然APC是從紅藻、藍(lán)綠藻(如螺旋藻)中提取的藻膽蛋白(Phycobiliprotein),由α和β亞基以(αβ)?形式組成三聚體結(jié)構(gòu),分子量約105 kDa。
每個(gè)亞基含一個(gè)藻藍(lán)素發(fā)色團(tuán)(Phycocyanobilin, PCB),具有高光吸收率和高熒光量子產(chǎn)率。
交聯(lián)的核心操作:通過(guò)化學(xué)方法(如雙功能試劑SMCC/SPDP)在α和β亞基間形成共價(jià)鍵(如硫醚鍵),增強(qiáng)其結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性,同時(shí)保留天然APC的光譜特性。
【使用方法】
蛋白交聯(lián)步驟(以抗體標(biāo)記為例)
硫醇化蛋白X(如抗體):
用SPDP(succinimidyl 3-(2-pyridyldithio)propionate)修飾賴氨酸殘基,摩爾比5:1–10:1(SPDP:蛋白)。
還原劑TCEP解離保護(hù)基團(tuán),生成游離硫醇(-SH)。
馬來(lái)酰亞胺化蛋白Y(CL-APC):
用SMCC(succinimidyl maleimide)修飾,摩爾比10:1–20:1(SMCC:蛋白)。
偶聯(lián)反應(yīng):
將硫醇化蛋白X與馬來(lái)酰亞胺化CL-APC按1:1摩爾比混合,室溫反應(yīng)3小時(shí)形成穩(wěn)定硫醚鍵。
用NEM(N-ethylmaleimide)封閉剩余硫醇基團(tuán),避免非特異性結(jié)合。
【相關(guān)試劑】
FM 2-10膜電位熒光探針
FM 4-64膜電位熒光探針
Chloramphenicol, USP Grade
Carbenicillin,Disodium Salt
Tide Quencher 6WS馬來(lái)酰亞胺
Amyloid β Peptide 1-42,Human
pCAMBIA1305.1 Plant Expression Vector
pCAMBIA1305.2 Plant Expression Vector
E coli C41(DE3) Strain大腸桿菌C41(DE3)甘油菌
SYTO 9 (10,000× in DMSO) LAMP用核酸染料
N-Acetyl-D-lactosamine (LacNAc) N-乙酰-D-乳糖胺
6'-Sialyllactose Sodium Salt (6'-SL) 6'-唾液乳糖鈉鹽
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