【參數(shù)信息】

英文名稱：RiboGreen RNA檢測(cè)試劑

激發(fā)波長：500 nm

發(fā)射波長：525 nm

消光系數(shù)（EC）：67,000 cm?1M?1

量子產(chǎn)率（QY）：0.65

純度：≥95%

儲(chǔ)存條件：-20℃避光干燥

生產(chǎn)廠商：西安強(qiáng)化生物科技

【簡(jiǎn)單概述】

RiboGreen RNA檢測(cè)試劑是一種超靈敏熒光核酸染料，可以用于溶液中RNA的定量檢測(cè)。

核心特點(diǎn)包括：

超高靈敏度：

可以檢測(cè)低至1 ng/mL的RNA濃度，比傳統(tǒng)紫外分光光度法（260 nm吸光度法）靈敏度高1000倍以上。

特異性與抗干擾性：

對(duì)RNA具有高親和力，且不受游離核苷酸、蛋白質(zhì)、鹽離子等常見污染物影響，避免假陽性或假陰性結(jié)果。

應(yīng)用場(chǎng)景：

適用于微量RNA樣本分析，如體外轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物定量、Northern Blot、cDNA文庫構(gòu)建、 逆轉(zhuǎn)錄PCR 及RNA測(cè)序前濃度校準(zhǔn)等。

【標(biāo)準(zhǔn)操作流程】

（一）試劑準(zhǔn)備

緩沖液配制：使用無核酸酶的1×TE緩沖液。20×TE儲(chǔ)存液需用DEPC處理水稀釋，并高壓滅菌去除DEPC。

工作液稀釋：

高范圍：1:200稀釋原液

低范圍：1:2000稀釋

關(guān)鍵注意事項(xiàng)：

使用聚丙烯塑料容器。

現(xiàn)配現(xiàn)用，避光保存≤3小時(shí)，長期儲(chǔ)存導(dǎo)致光降解。

DMSO原液使用前需平衡至室溫，防止吸水失效。

（二）標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

RNA標(biāo)準(zhǔn)品：建議使用16S/23S rRNA，用TE稀釋至2 μg/mL。

梯度稀釋：

高范圍：從2 μg/mL稀釋至終濃度1,000–10 ng/mL。

低范圍：先稀釋至100 ng/mL，再梯度稀釋至50–2.5 ng/mL。

反應(yīng)體系：等體積混合RNA標(biāo)準(zhǔn)品與工作液（如各100 μL），室溫避光孵育2-5分鐘。

（三）樣本檢測(cè)

預(yù)處理：若含DNA，需DNase消化，再用TE稀釋≥10倍降低鹽離子干擾。

檢測(cè)步驟：

樣本用TE稀釋至預(yù)期濃度范圍。

加等體積RiboGreen工作液，避光孵育2-5分鐘。

熒光檢測(cè)：激發(fā)480 nm/發(fā)射520 nm，儀器增益需根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線高點(diǎn)調(diào)整。

數(shù)據(jù)分析：扣除試劑空白熒光值，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算RNA濃度。

（四）儀器選擇

微孔板讀數(shù)器：推薦200 μL反應(yīng)體系（96孔板），檢測(cè)限200 pg RNA。

微量檢測(cè)儀：NanoDrop 3300僅需1 μL樣品，適合珍貴樣本。

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本試劑僅適用于科研實(shí)驗(yàn)，敬請(qǐng)知悉。