【參數(shù)信息】

英文名稱：TOP 10 Electrocompetent cell

中文名稱：大腸桿菌TOP 10電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

形態(tài)：液態(tài)懸浮細(xì)胞

純度：≥95%

儲(chǔ)存條件：-20℃避光干燥

生產(chǎn)廠商：西安強(qiáng)化生物科技

【簡(jiǎn)單概述】

TOP 10 Electrocompetent cell電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞是一種通過(guò)特殊工藝處理大腸桿菌TOP 10 菌株制備的工程化細(xì)胞， 用于電擊轉(zhuǎn)化，不適用于熱激轉(zhuǎn)化。

其核心設(shè)計(jì)目標(biāo)是實(shí)現(xiàn)外源DNA的導(dǎo)入，同時(shí)保證質(zhì)粒穩(wěn)定性和純度。

轉(zhuǎn)化效率：

經(jīng)pUC19質(zhì)粒（2686 bp, AmpR）檢測(cè)，轉(zhuǎn)化效率 >1×101? cfu/μg DNA。

【作用機(jī)制】

作用機(jī)制：電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞的通用與TOP 10 特異性

(一) 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞的通用作用機(jī)制

電穿孔的核心是通過(guò)高壓電脈沖瞬時(shí)改變細(xì)胞膜通透性：

細(xì)胞膜穿孔：

施加高壓電場(chǎng)→ 細(xì)胞膜磷脂層形成納米級(jí)孔隙，外源DNA通過(guò)孔隙進(jìn)入胞質(zhì)。

DNA內(nèi)化與修復(fù)：

DNA進(jìn)入后，細(xì)胞在復(fù)蘇培養(yǎng)基中修復(fù)膜結(jié)構(gòu)，恢復(fù)生長(zhǎng)并表達(dá)外源基因。

細(xì)胞膜的流動(dòng)性使孔隙在毫秒級(jí)內(nèi)閉合，避免細(xì)胞損傷。

高效性原因：

電穿孔效率比化學(xué)法高1-2個(gè)數(shù)量級(jí)，尤其適合大片段DNA（>30 kb）或復(fù)雜結(jié)構(gòu)載體的轉(zhuǎn)化。

(二) TOP 10 菌株的特異性作用機(jī)制

TOP 10 的基因型設(shè)計(jì)使其在電轉(zhuǎn)過(guò)程中具有優(yōu)勢(shì)：

DNA穩(wěn)定性增強(qiáng)：

recA1突變：阻斷同源重組途徑，降低插入片段重排概率。

endA1突變：消除核酸內(nèi)切酶I的降解作用，提高質(zhì)粒提取純度。

廣譜DNA兼容性：

Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)：解除對(duì)甲基化DNA的限制，可轉(zhuǎn)化真核來(lái)源的甲基化DNA。

mcrA缺失：允許高效轉(zhuǎn)化PCR產(chǎn)物的未甲基化DNA。

快速克隆表達(dá)：

生長(zhǎng)速度介于DH5α與Mach1-T1之間，10小時(shí)內(nèi)可見克隆。

阿拉伯糖代謝缺陷型（araΔ139）：適用于基于araBAD啟動(dòng)子的誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)，避免誘導(dǎo)劑降解。

【相關(guān)試劑】

DiOC18(3)

DiOC5(3)

CDCFDA，SE

Z-YVAD-FMK

Z-DEVD-FMK

APC-Streptavidin，APC

PE-Streptavidin,PE-Cy7

Lucifer Yellow Cadaverine

6-NBDG葡萄糖攝取熒光探針

Hypoxyprobe-F6(CCI-103F)

Alexa Fluor 555-Streptavidin

Alexa Fluor 594-Streptavidin

Ethidium Monoazide Bromide

TB1 Chemically Competent Cell

BL21-AI Chemically Competent Cell

BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL Competent Cell

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本試劑僅適用于科研實(shí)驗(yàn)，敬請(qǐng)知悉。