【參數(shù)信息】

英文名稱(chēng)：GT115 Electrocompetent Cell

中文名稱(chēng)：GT115 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

運(yùn)輸條件：干冰運(yùn)輸。

穩(wěn)定性關(guān)鍵因素：

反復(fù)凍融會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率；

高于-80℃會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞損傷。

純度：≥95%

儲(chǔ)存條件：-20℃避光干燥

生產(chǎn)廠(chǎng)商：西安強(qiáng)化生物科技

【簡(jiǎn)單概述】

GT115 Electrocompetent Cell是一種通過(guò)電穿孔技術(shù)實(shí)現(xiàn)外源DNA高效轉(zhuǎn)化的大腸桿菌工程菌株。

用于克隆含發(fā)夾結(jié)構(gòu)或重復(fù)序列等復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)的DNA片段。

其核心特性包括：

基因型特殊性

基因型：F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15ΔlacX74 recA1 rpsL (StrR) endA1 Δdcm uidA(ΔMluI)::pir-116 ΔsbcC-sbcD 。

關(guān)鍵突變：

ΔsbcC-sbcD：消除SbcCD蛋白復(fù)合體活性，防止其識(shí)別并切割DNA發(fā)夾結(jié)構(gòu)，提升發(fā)夾結(jié)構(gòu)質(zhì)粒的穩(wěn)定性與拷貝數(shù) 。

uidA(ΔMluI)::pir-116：表達(dá)π蛋白（Pi protein），支持含R6Kγ復(fù)制原點(diǎn)的質(zhì)粒的復(fù)制 。

recA1和endA1突變：抑制重組酶和核酸酶活性，減少外源DNA降解，提高質(zhì)粒純度 。

rpsL (StrR)：賦予鏈霉su抗性，便于轉(zhuǎn)化篩選 。

電轉(zhuǎn)特性

通過(guò)高壓電脈沖在細(xì)胞膜上形成瞬時(shí)孔隙，使DNA直接進(jìn)入胞內(nèi)，轉(zhuǎn)化效率高達(dá) >1×101? cfu/μg DNA，遠(yuǎn)超化學(xué)法 。

適用于文庫(kù)構(gòu)建、大質(zhì)粒轉(zhuǎn)化及低濃度DNA樣品 。

【使用方法】

（1）將0.1 cm電擊杯和杯蓋從儲(chǔ)存液中拿出倒置于干凈吸水紙上5min，待其瀝干水分，正置5min，使乙醇充分揮發(fā)干凈，立即插入冰中，壓實(shí)冰面，電極杯頂離冰面0.5cm以方便蓋上杯蓋，冰中靜置5min使其充分降溫。

（2）取-80℃保存的感受態(tài)細(xì)胞插入冰中5min，待其融化。

（3）往50μl感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA，用手撥管底使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡，立即插入冰中。

（4）用槍輕輕吹打混勻感受態(tài)細(xì)胞-DNA之后快速轉(zhuǎn)移到電擊杯中，避免產(chǎn)生氣泡，輕輕晃動(dòng)使液面保持水平，蓋上杯蓋，插入冰中。

（5）啟動(dòng)電轉(zhuǎn)儀，設(shè)置參數(shù)：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV，將電擊杯從冰內(nèi)取出，用吸水紙擦干表面水漬，放入電轉(zhuǎn)槽中，電擊完成后取出電擊杯放室溫。

打開(kāi)杯蓋，15s內(nèi)加入900μl無(wú)抗生素的無(wú)菌S.O.C.培養(yǎng)基，用1ml槍吹吸電擊杯底部數(shù)次混勻后，轉(zhuǎn)移到50ml離心管，向離心管內(nèi)補(bǔ)加預(yù)熱的S.O.C.培養(yǎng)基定容至10ml。

于37℃，225rpm振蕩復(fù)蘇培養(yǎng)1h。

（6）5,000rpm離心1min，重懸后取100~200μl加到含相應(yīng)抗生素的S.O.C.平板上，用無(wú)菌玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開(kāi)。

室溫正置10 min，待液體被吸收后，倒置平板，37℃過(guò)夜培養(yǎng)13~17h。

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