試劑名稱(chēng)：DiSC3(5)，多功能熒光染料DiSC3(5)

儲(chǔ)存：-20℃干燥避光保存至少1年，冰袋運(yùn)輸。

產(chǎn)地：西安強(qiáng)化生物

CAS NO：53213-94-8

分子式：C25H27IN2S2

分子量：546.53

一、描述與基本特性

多功能熒光染料DiSC3(5)，主要用于檢測(cè)和測(cè)量細(xì)胞膜電位的變化，特別是在膜去極化實(shí)驗(yàn)中。

它通過(guò)聚集在細(xì)胞膜的磷脂雙分子層中，導(dǎo)致熒光淬滅；當(dāng)膜電位發(fā)生變化時(shí)，DiSC3(5)會(huì)釋放并增強(qiáng)熒光，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)膜電位變化的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。

結(jié)構(gòu)特征：

由兩個(gè)苯并噻唑單元通過(guò)共軛雙鍵連接，兩端含丙基鏈，氮原子帶正電荷，賦予其膜通透性；屬于硫雜二羰花青類(lèi)熒光染料。

二、核心應(yīng)用場(chǎng)景與避坑要點(diǎn)

（一）膜電位研究

原理：染料在超極化膜上聚集導(dǎo)致熒光淬滅，去極化時(shí)釋放至溶液中熒光增強(qiáng)，強(qiáng)度與電位變化正相關(guān)。

避坑指南：

濃度控制：工作液需維持1% DMSO濃度，避免染料沉淀。

干擾因素：陽(yáng)離子化合物可能競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合膜，導(dǎo)致假陰性；需設(shè)短gan菌肽陽(yáng)性對(duì)照。

實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)：熒光信號(hào)延遲約30秒，需同步記錄時(shí)間軸。

（二）細(xì)菌活性檢測(cè)

原理：活細(xì)菌完整膜積聚染料發(fā)熒光，死細(xì)胞膜破裂熒光減弱。

避坑指南：

菌株選擇：推薦用外膜缺陷型大腸桿菌（如DC2），增強(qiáng)染料滲透性。

抗生素干擾：β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素可能引起溶菌性熒光驟降，誤判為死細(xì)胞；建議聯(lián)用SYTOX Green雙驗(yàn)證。

（三）線粒體膜電位分析

關(guān)鍵問(wèn)題：細(xì)胞凋亡早期線粒體去極化熒光增強(qiáng)，但晚期膜破裂熒光消散，需區(qū)分階段。

避坑方案：

聯(lián)用JC-1染料（聚合/單體熒光比色法），提高準(zhǔn)確性。

避免CCCP（解耦聯(lián)劑）濃度過(guò)高，導(dǎo)致非特異性膜損傷。

（四）流式細(xì)胞術(shù)

信號(hào)淬滅：激光照射易致光漂白，需添加抗淬滅劑（如DABCO）。

多色兼容性：避免與遠(yuǎn)紅光通道（>650 nm）染料（如Cy5）共用，防止串?dāng)_。

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