試劑名稱：Fluo-3 Pentapotassium Salt Fluo-3五鉀鹽

儲存：-20℃干燥避光保存至少1年，冰袋運輸。

產(chǎn)地：西安強化生物

CAS NO： 853400-67-6

分子式：C36H25Cl2K5N2O13

分子量：959.99

一、描述與基本特性

Fluo-3 Pentapotassium Salt，熒光鈣離子指示劑Fluo-3五鉀鹽，可應用于生物醫(yī)學研究。

化學結構：基于熒光素骨架，修飾BAPTA以增強Ca2+親和力 。

用途：用于檢測細胞內(nèi)游離Ca2+濃度，實現(xiàn)鈣動力學的實時監(jiān)測。適用于流式細胞術、熒光顯微鏡等技術

作用機制：熒光強度與鈣離子結合的正相關

熒光鈣離子指示劑Fluo-3五鉀鹽的核心作用機制是 "熒光強度隨Ca2+濃度增強" ，具體過程如下：

無鈣狀態(tài)：游離的Fluo-3幾乎無熒光（量子產(chǎn)率極低），因發(fā)色團受BAPTA基團的電子轉(zhuǎn)移抑制而淬滅。

鈣結合狀態(tài)：當結合Ca2+后，BAPTA的羧基與Ca2+螯合，分子構象變化解除發(fā)色團淬滅，熒光強度增強60-100倍（增強80倍）。

動態(tài)響應：熒光強度變化（ΔF）與Ca濃度呈正比，其中解離常數(shù)為 390–450 nM，適用于胞質(zhì)鈣濃度（~100 nM至μM級）檢測。

關鍵優(yōu)勢：單波長激發(fā)/發(fā)射設計兼容流式細胞儀、共聚焦顯微鏡等設備，無需比率測量即可快速動態(tài)監(jiān)測。

二、實驗操作指南

（一）探針加載方法

細胞加載: 因膜滲透性差，需通過微注射、膜片鉗電極導入或劃痕標記法加載 。

工作液配制:

母液：高純度無水 DMSO 配制 2–5 mM 儲備液 。

工作濃度：2–20 μM。

減少探針泄漏: 添加有機陰離子轉(zhuǎn)運體抑制劑：

Probenecid。

Sulfinpyrazone。

（二）檢測流程

孵育: 工作液與細胞在室溫孵育 20–120 分鐘，再置換緩沖液移除多余探針 。

檢測設備:

激發(fā)波長 506 nm，發(fā)射波長 526 nm 。

兼容氬離子激光器及流式 FL1 通道。

（三）干擾控制

重金屬干擾: BAPTA 結構易結合 Zn2+/Mn2+等，建議添加重金屬螯合劑 TPEN 。

探針流出: 細胞類型差異導致保留時間不同，需在加載后 1–2 小時內(nèi)完成實驗 。

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用于科研相關領域，不能用于人體實驗！

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