【使用方法】
（一）探針配制
儲(chǔ)備液：
溶解1 mg CDCFDA于0.21 mL DMSO，配制成10 mM儲(chǔ)存液，分裝后-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
工作液：
用無血清細(xì)胞培養(yǎng)基或PBS稀釋儲(chǔ)備液至0.5-25 μM（根據(jù)細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)需求調(diào)整）。
（二）細(xì)胞處理
懸浮細(xì)胞：
4℃離心（1000 g，3-5分鐘），PBS洗滌2次，棄上清后加入1 mL工作液。
貼壁細(xì)胞：
yi酶消化后離心，PBS洗滌，棄上清后加入1 mL工作液。
（三）孵育與洗滌
孵育：37℃、5% CO?條件下孵育15-45分鐘（避免過長(zhǎng)導(dǎo)致假陽(yáng)性）。
洗滌：4℃離心（400 g，3-4分鐘），棄上清后PBS洗滌2次，每次5分鐘。
（四）檢測(cè)
熒光顯微鏡：設(shè)置504 nm激發(fā)/529 nm發(fā)射濾光片，觀察綠色熒光。
流式細(xì)胞儀：使用FL2通道（525/50 nm）檢測(cè)，建議聯(lián)用死細(xì)胞染料（如PI）排除干擾。
【技術(shù)參數(shù)】
化學(xué)名稱：5(6)-Carboxy-2'',7''-dichlorofluorescein Diacetate
中文名稱：5[6]-羧基-2',7'-二氯熒光素二乙酸酯
英文名稱：5-(6)-CDCFDA
CAS NO：127770-45-0
分子式：C25H14Cl2O9
分子量：529.28 g/mol
狀態(tài)：白色固體
激發(fā)波長(zhǎng)：504nm
發(fā)射波長(zhǎng)：529nm
純度：≥95%
儲(chǔ)存條件：-20℃避光干燥
【作用機(jī)制】
5[6]-羧基-2',7'-二氯熒光素二乙酸酯（5-(6)-CDCFDA）的作用機(jī)制分為以下三步，依賴細(xì)胞代謝活性和膜完整性：
（一）細(xì)胞滲透與酯酶水解
被動(dòng)擴(kuò)散：探針以非極性形式自由穿過活細(xì)胞膜，死細(xì)胞因膜破損無法積累。
酯酶活化：胞內(nèi)非特異性酯酶水解乙酸基團(tuán)，生成帶負(fù)電荷的羧基熒光素（5-(6)-CDCFDA），無法穿透完整細(xì)胞膜，僅滯留于活細(xì)胞內(nèi)。
關(guān)鍵點(diǎn)：水解過程反映細(xì)胞酯酶活性，間接評(píng)估代謝功能。
（二）熒光信號(hào)檢測(cè)
活細(xì)胞內(nèi)熒光產(chǎn)物積累，熒光強(qiáng)度與細(xì)胞活力正相關(guān)。
死細(xì)胞因膜通透性增加導(dǎo)致熒光泄漏，可通過流式細(xì)胞術(shù)或熒光顯微鏡定量分析。
（三）多功能擴(kuò)展應(yīng)用
ROS檢測(cè)：二氯基團(tuán)可被ROS（如H?O?、·OH）氧化，熒光強(qiáng)度變化反映ROS水平。
pH傳感：pKa≈4.8，在酸性環(huán)境中熒光增強(qiáng)，適用于細(xì)胞器pH監(jiān)測(cè)。
細(xì)菌活性檢測(cè)：通過膜通透性變化區(qū)分活/死細(xì)菌。
【相關(guān)的試劑】
iFluor 790炔烴
trFluor Eu DBCO
PE-Streptavidin
PE-Cy7標(biāo)記鏈霉親和素
Buccutite 蛋白交聯(lián)試劑盒
Mag-520 Potassium Salt
Alexa Fluor 405-Streptavidin
Buccutite APC抗體標(biāo)記試劑盒
iFluor 790 acid iFluor 790酸
iFluor 830 acid iFluor 830 酸
mFluor Green 630琥珀酰亞胺酯
ReadiLink AF647抗體快速標(biāo)記試劑盒
ReadiLink iFluor 633抗體標(biāo)記試劑盒
ReadiLink iFluor 790抗體標(biāo)記試劑盒
ReadiLink AF488抗體快速標(biāo)記試劑盒
iFluor 665 succinimidyl ester iFluor 665琥珀酰亞胺酯
iFluor 860 succinimidyl ester iFluor 860 琥珀酰亞胺酯
iFluor 625 succinimidyl ester iFluor 625 琥珀酰亞胺酯
注意：本試劑用于科研領(lǐng)域，其他用途概不適用！
編輯：以上內(nèi)容由西安強(qiáng)化生物科技xxn整理！
采購(gòu)中心
