【染色步驟】
（一）固定細(xì)胞
操作：吸棄培養(yǎng)液，用預(yù)熱的1×PBS清洗2次后，加入4%多聚甲醛（溶于PBS）室溫固定10分鐘。
注意：避免使用含甲醇的固定劑，否則會(huì)破壞肌動(dòng)蛋白結(jié)構(gòu)。
（二）透化（可選）
操作：用0.5% Triton X-100或丙酮處理細(xì)胞5分鐘，增強(qiáng)探針滲透性。
注意：透化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)損傷，需根據(jù)細(xì)胞類型優(yōu)化。
（三）染色液配制
儲(chǔ)存液制備：將凍干粉室溫回溫20分鐘后，加入甲醇或DMSO溶解至20-100 μM，分裝后-20℃避光保存。
工作液制備：用1×PBS稀釋儲(chǔ)存液至80-200 nM（推薦100 nM起始濃度），含1% BSA可降低非特異性結(jié)合。
（四）孵育與洗滌
操作：每孔（96孔板）加入200 μL工作液，室溫避光孵育30-60分鐘（4℃至37℃均可）。
洗滌：用PBS清洗3次，每次30秒，去除未結(jié)合探針。
（五）復(fù)染與封片
核染色（可選）：用DAPI染色30秒，再用PBS清洗。
封片：滴加抗淬滅封片劑，蓋玻片封片后避光保存（可4℃保存24小時(shí)）。
【技術(shù)參數(shù)】
試劑名稱：5-TAMRA Phalloidin，5-TAMRA鬼筆環(huán)肽
中文名稱：5-羧基四甲基羅丹明 鬼筆環(huán)肽
激發(fā)波長(zhǎng)：555 nm
發(fā)射波長(zhǎng)：575 nm
純度：≥95%
儲(chǔ)存條件：-20℃避光干燥
【描述與結(jié)構(gòu)】
5-TAMRA鬼筆環(huán)肽是一種熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽探針，由鬼筆環(huán)肽與 5-羧基四甲基羅丹明通過(guò)化學(xué)偶聯(lián)形成。
它應(yīng)用于細(xì)胞骨架研究，是對(duì)纖維狀肌動(dòng)蛋白的特異性標(biāo)記和動(dòng)態(tài)分析。
組成與結(jié)構(gòu)
鬼筆環(huán)肽：一種天然雙環(huán)七肽毒素，來(lái)源于毒蘑菇鬼筆鵝膏，分子量約 789 Da，通過(guò)氫鍵和疏水作用特異性結(jié)合F-actin亞基界面，不與單體肌動(dòng)蛋白（G-actin）結(jié)合。
5-TAMRA：橙紅色熒光染料，激發(fā)波長(zhǎng)（Ex）為 555-565 nm，發(fā)射波長(zhǎng)（Em）為 575-580 nm，量子產(chǎn)率高且光穩(wěn)定性強(qiáng)，適合多色成像。
【相關(guān)的試劑】
PE-Streptavidin
PE-Cy7標(biāo)記鏈霉親和素
Mag-520 Potassium Salt
Alexa Fluor 405-Streptavidin
Alexa Fluor 647-Streptavidin
Alexa Fluor 680-Streptavidin
PTIO一氧化氮清除劑/NO清除劑
SYBR14NucleicAcidStain(5mM)
Lucifer Yellow CH dilithium salt
PropidiumMonoazide(PMA)疊氮溴化丙錠
Human Dil-Very Low DensityLipoprotein
Acti-stain555phalloidin橙紅色熒光標(biāo)記鬼筆環(huán)肽
Biotinylated Lycopersicon Esculentum (Tomato) Lectin (LEL, TL)
注意：本試劑用于科研領(lǐng)域，其他用途概不適用！
編輯：以上內(nèi)容由西安強(qiáng)化生物科技xxn整理！
采購(gòu)中心
