試劑名稱：Fluo-4?Pentapotassium?Salt，Fluo-4五鉀鹽

儲存：-20℃干燥避光保存至少1年，冰袋運(yùn)輸。

廠家：西安強(qiáng)化生物

分子式：C36H25F2K5N2O13

分子量：927.08

一、描述與基本特性：

Fluo-4?Pentapotassium?Salt，Fluo-4五鉀鹽是一種鈣離子熒光探針，具有非細(xì)胞膜滲透性，需通過微注射、膜片電極或劃痕標(biāo)記等方式加載進(jìn)入細(xì)胞以檢測胞內(nèi)鈣離子水平 。

其在無鈣離子存在時(shí)幾乎不發(fā)光，但與鈣離子結(jié)合后熒光強(qiáng)度至少增加100倍，激發(fā)波長為494 nm，發(fā)射波長為516 nm 。

此外，Fluo-4五鉀鹽的解離常數(shù)（Kd）為345 nM（Ca2+），適用于檢測高瞬時(shí)鈣離子濃度 。

核心應(yīng)用：細(xì)胞內(nèi)鈣離子動(dòng)態(tài)監(jiān)測

檢測原理：鈣結(jié)合后觸發(fā)分子內(nèi)電荷轉(zhuǎn)移，激活熒光團(tuán)。

適用場景：

瞬態(tài)鈣信號：如神經(jīng)元?jiǎng)幼麟娢弧⑿募〖?xì)胞鈣震蕩。

設(shè)備兼容性：激光共聚焦顯微鏡、流式細(xì)胞儀、熒光酶標(biāo)儀。

對比優(yōu)勢：

較Fluo-3熒光強(qiáng)度提升近一倍，激發(fā)效率更高。

選擇性優(yōu)于其他二價(jià)陽離子。

細(xì)胞加載方法

膜滲透性：非滲透性。

加載方式：

微注射、膜片鉗電極、劃痕標(biāo)記、胞飲作用。

固定化應(yīng)用：通過EDC/EDAC處理可原位固定于細(xì)胞，兼容免疫熒光研究。

二、合成方法與制備

1. 合成路線關(guān)鍵步驟

母體結(jié)構(gòu)修飾：以Fluo-3為基礎(chǔ)，氯離子（Cl?）替換為氟離子（F?）。

氟化反應(yīng)：

可能涉及KF催化（如離子對促進(jìn)劑[(n-Bu)?N?]?SO??）在t-BuOH/H?O中90°C反應(yīng)。

或使用NFSI（N-氟代雙苯磺酰亞胺）在低溫條件下進(jìn)行。

成鹽步驟：羧酸前體與氫氧化鉀中和，生成五鉀鹽以提升水溶性。

2. 工業(yè)純化與質(zhì)控

大規(guī)模自動(dòng)化合成，色譜純化確保純度≥90%。

質(zhì)量控制：HPLC驗(yàn)證純度，避免雜質(zhì)干擾鈣結(jié)合。

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