【參數(shù)信息】
英文名稱：Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit
中文名稱：螢火蟲螢光素酶報告基因檢測試劑盒
CAS NO：61970-00-1
分子量：約61kDa
狀態(tài)：白色粉末
熱穩(wěn)定性：高溫下發(fā)光波長紅移，酶活性在常溫（20–25°C）穩(wěn)定
溶解性： 需用高鹽緩沖液（如1 M Tris，pH 7–8）復溶
純度：≥95%
儲存條件：-20℃避光干燥
生產(chǎn)廠商：西安強化生物科技
【簡單概述】
螢火蟲螢光素酶普遍用作一種報告基因來研究基因調(diào)控和功能，以及用于藥物篩選。由于哺乳動物細胞或組織缺乏任何內(nèi)源性的熒光素酶活性和生物發(fā)光的天然屬性，螢火蟲熒光素酶是一種非常靈敏的遺傳報告子。
螢火蟲螢光素酶是一種分子量~61kD的蛋白，在ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下，可以催化螢光素（Luciferin）氧化成氧化熒光素，在此氧化過程中釋放出生物螢光。這一熒光可通過化學發(fā)光儀或液閃測定儀進行測定。
Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit，正是利用螢光素為底物來檢測細胞內(nèi)螢火蟲螢光素酶活性的試劑盒，操作簡單、快速、靈敏且呈良好的線性關系。
優(yōu)勢
裂解能力強：能夠裂解絕大部分種類細胞。
信號更強：能夠精準檢測弱啟動子的表達。
靈敏度更高：可檢測低至數(shù)百個細胞樣本。
線性范圍廣：線性檢測范圍超過酶濃度的8個數(shù)量級。
【作用機制：生物發(fā)光反應與基因表達檢測】
熒光素酶催化的生化反應是試劑盒的核心機制，分為以下兩步：
酶促發(fā)光反應：
在 Mg2+、ATP、O2 存在下，熒光素酶（分子量61 kDa）催化底物 D-熒光素 氧化脫羧，生成 氧化熒光素，并釋放波長 560 nm 的黃綠色光。
基因表達關聯(lián)性：
將目標基因的啟動子、增強子或 3'-UTR 等調(diào)控序列克隆至熒光素酶基因上游/下游，構(gòu)建報告基因質(zhì)粒。
轉(zhuǎn)染細胞后，目標基因的轉(zhuǎn)錄活性直接驅(qū)動熒光素酶表達，酶活性強度與基因表達水平正相關。
通過測量發(fā)光值，可量化藥物處理、信號通路激活等對基因轉(zhuǎn)錄的影響。
雙報告系統(tǒng)的協(xié)同作用：
為排除轉(zhuǎn)染效率差異的干擾，試劑盒常整合 海腎熒光素酶（Renilla luciferase） 作為內(nèi)參：
螢火蟲熒光素酶檢測目標基因活性，海腎熒光素酶（底物為腔腸素）提供基線校正。
加入抑制劑淬滅螢火蟲信號后，再檢測海腎信號，確保結(jié)果準確性。
【相關試劑】
DiOC18(3), 34215-57-1
CDCFDA,SE活細胞示蹤探針
Alexa Fluor 405-Streptavidin
Alexa Fluor 647-Streptavidin
Alexa Fluor 680-Streptavidin
2-NBDG葡萄糖攝取熒光探針
D-Luciferin,Sodium Salt
Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit
Renilla Luciferase Reporter Gene Assay Kit
Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit
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本試劑僅適用于科研實驗，敬請知悉。
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