PCR Master Mix 超高保真酶預混液 產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 |
2×Profusion™ PCR Master Mix 高保真酶預混液 | HRF0088 | 1 mL |
HRF0089 | 5×1 mL |
產(chǎn)品描述
本產(chǎn)品包含 Profusion™ DNA Polymerase、dNTPs 和優(yōu)化的反應緩沖液，濃度為2×。 使用時只需加入模板、引物，并補足水至 Mix 終濃度為 1×即可。Profusion™ DNA Polymerase為多種采用先進基因工程改造而來的超高保真酶添加延伸因子混合而成，極大的提高了擴增長度、擴增速度、保真性和產(chǎn)量。Profusion™ PCR Master Mix 是長片段超保真快速擴增的選擇產(chǎn)品。本制品含紅色示蹤染料，不需添加上樣緩沖液即可直接上樣進行電泳；也可經(jīng)過純化處理，以用于酶切、連接、熒光測序等后續(xù)操作。PCR 產(chǎn)物為平末端，不需要加 A 頭，可直接用荷瑞 pTOPO Blunt 平末端系列載體（貨號 HRF0161、HRF0171）克隆。
2×Profusion™ PCR Master Mix 具有快速簡便、靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性好等優(yōu)點，反應體系只需加入引物 和模板即可，并可以通過兩步法的程序進行擴增，簡化了實驗步驟，節(jié)省了時間。
產(chǎn)品特點
1.擴增速度快：延伸速度可以達到 3-4kb/min，是pfu的 6-8 倍。
2.擴增產(chǎn)量高：一般PCR產(chǎn)物量比傳統(tǒng) pfu產(chǎn)量高 50%-100%。
3.優(yōu)異保真性：保真度是taq的54倍以上。一般隨機挑一個菌測序便是正確無突變菌落。
4.擴增長度長：以復雜基因組 DNA 為模板適合擴增不超過 10kb 左右的產(chǎn)物，以簡單基因組、質(zhì)粒和噬菌體DNA為模板適合擴增不超過15kb 左右的產(chǎn)物。
產(chǎn)品應用
基因克?。粡碗s DNA 模板擴增；高通量建庫。
運輸和保存方法
冰袋運輸。-20℃保存，有效期2年。
注意事項
1）解凍后 Master Mix 可能出現(xiàn)晶體沉淀,使用前務必渦旋振蕩混勻至沉淀消失，不影響試劑性能。
2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作；
3）本產(chǎn)品僅作科研用途！
PCR Master Mix 超高保真酶預混液 推薦PCR反應體系（冰上配制）
組分 | 體積（μL） | 終濃度 |
ddH2O | to 50 μL | - |
2×Profusion™ PCR Master Mix | 30 μL | 1× |
DNA 模板 | 適量 | - |
Primer 正向 (10 μM) | 2.5 μL | 0.5 μM |
Primer 反向 (10 μM) | 2.5 μL | 0.5 μM |
參考模板用量（50 μl 反應體系）：
模板種類 | DNA模板用量 |
人類基因組 DNA | 50 ng-150 ng |
細菌基因組DNA | 10-100 ng |
質(zhì)粒 | 0.1-10 ng |
cDNA | 1-5 μL From RT reaction |
建議PCR擴增程序
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預變性 | 95℃ | 3 min | 1 |
變性 | 95℃ | 10 sec | 30 |
退火 | Tm | 15 sec | |
延伸 | 72℃ | 20 sec/kb | |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
4-8℃ | Hold |
注意事項：
1. 2×Profusion™ PCR Master Mix擴增速度快，質(zhì)粒和簡單基因組等簡單模板可以采用10-15秒/kb；復雜模板如人類基因組可以采用20-25 秒/kb。
2. 如果電泳發(fā)現(xiàn)主帶上下拖尾模糊現(xiàn)象，或者泳道出現(xiàn)從上樣孔拖下來的涂抹帶現(xiàn)象，一般提示延伸時間過長，梯度縮短延伸時間（建議 10-15 秒/kb 為梯度減少延伸時間）直到獲得滿意結(jié)果。
3. 對于GC含量很高的模板，預變性和變性溫度可以提高到98℃。Profusion™ DNA Polymerase耐熱性強，98℃對酶的活性無影響。
4. 如果擴增模板GC含量高或者模板復雜擴增效果不佳時，可在反應混合物中加入DMSO到終濃度1%-8%，按照1%梯度增加摸索最佳濃度。或者加入甜菜堿至終濃度1.0-1.7M。并采用降落PCR（Touch down PCR）
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