產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 |
HRbio™ miRNA RT-qPCR Detection Kit HRbio™ miRNA逆轉(zhuǎn)錄熒光定量PCR檢測試劑盒 | HRF0721 | 25次逆轉(zhuǎn)錄+500次qPCR反應(yīng) |
產(chǎn)品描述
本產(chǎn)品HRbio™ miRNA RT-qPCR Detection Kit包含miRNA檢測的全部試劑。本制品采用Poly(A)加尾法,以miRNA為模板,采用特殊優(yōu)化預(yù)混合miRNA RT Enzyme mix(包含 Poly(A)加尾酶和逆轉(zhuǎn)錄酶)將 Poly(A)加尾和逆轉(zhuǎn)錄一步法高效完成cDNA 合成;miRNA檢測使用 2×miRNA qPCR Mix。適用于Total RNA或者small RNA等包含 miRNA 的樣品。
產(chǎn)品特點(diǎn)
1. Poly(A)加尾酶和反轉(zhuǎn)錄酶配比及優(yōu)化的反應(yīng)buffer,確保miRNA 的逆轉(zhuǎn)錄效率。
2.PolyA 加尾和逆轉(zhuǎn)錄cDNA合成在同一管內(nèi)一步法完成。
3.2×miRNA qPCR Mix 擴(kuò)增效率高,特異性強(qiáng)和靈敏度高。
4.配套ROX Reference Dye,可以用于各種需要高低 ROX 參比染料的機(jī)型。
產(chǎn)品組分
編號 | 組分 | HRF0721(25T) |
HRF072-A | miRNA RT Enzyme Mix | 50 μL |
HRF072-B | 2×miRT Reaction Mix | 250 μL |
HRF072-C | Reverse primer(10μM ) | 200 μL |
HRF072-D | 2 ×miRNAqPCR Mix(With SYBR Green) | 5mL |
HRF072-E | ROX Reference Dye | 100 μL |
HRF072-F | RNase free H2O | 1 mL |
運(yùn)輸和保存方法
干冰運(yùn)輸。-20℃保存,避免反復(fù)凍融,有效期1年。
使用方法
一、miRNA 3’末端進(jìn)行Poly (A)加尾和逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)(鏈合成)
1.解凍2×miRNA RT Reaction Mix并混勻,miRT Enzyme Mix放于冰中備用,加入以下試劑至總體積20μl(注意:最后加入miRNA RT Enzyme Mix)
| 組分 | 體積 | 終濃度 |
Total RNA (見注意事項(xiàng)) | x μL | Up to 2μg |
2 ×miRNA RT Reaction Mix | 10 μL | 1× |
miRNA RT Enzyme Mix | 2 μL(見注意事項(xiàng)) | - |
加RNase free H2O補(bǔ)足到 | 20 μL | - |
2.移液器輕輕混勻上述配制的反應(yīng)液,短暫離心后在42°C反應(yīng)60 min。
3.85°C加熱5秒鐘失活miRNA RT Enzyme Mix。
4.合成的cDNA反應(yīng)液可放置于-20°C保存;也可以直接進(jìn)行下游PCR或者熒光定量PCR檢測。
注意事項(xiàng)
1.miRNA RT Enzyme Mix比較粘稠,溶液容易吸附在管壁和吸頭外導(dǎo)致?lián)p失,用前請點(diǎn)甩離心,并且避免吸頭外壁沾附損失。Enzyme Mix內(nèi)酶都是過量的,即使每次按照 1.8μl使用,也不影響使用效果。
2.在反應(yīng)中使用的total RNA 必須包含有小分子RNA(miRNA)。此過程也可以使用富集的miRNA, 單純miRNA無法直接用分光光度計(jì)定量,建議直接加入2μl ~5μl??筛鶕?jù)目的miRNA豐度決定加入量,但是對于低豐度miRNA 樣品而言(如血清血漿提取物),可直接加入體積8 μl。
3.按照上述操作步驟得到的cDNA模板用于下游PCR或者熒光定量PCR檢測時,可以根據(jù)實(shí)際情況選擇使用量,對于特殊的檢測體系中,高含量的cDNA 模板易導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增,可根據(jù)所檢測miRNA 的豐度適當(dāng)?shù)南♂宑DNA(5-10倍或者100倍)后使用。如果發(fā)現(xiàn)有非特異擴(kuò)增條帶,或者溶解曲線顯示有非特異擴(kuò)增,往往提示cDNA模板過量, 可以嘗試將上述cDNA模板稀釋幾十到幾百倍甚至上千倍再使用。miRNA逆轉(zhuǎn)錄熒光定量PCR檢測試劑盒
4、本產(chǎn)品僅作科研用途!
















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