安捷倫高效液相色譜儀_高效液相色譜儀使用步驟
一、高效液相色譜儀使用步驟常規(guī)操作
(1)．過濾流動相，根據(jù)需要選擇不同的濾膜。
(2)．對抽濾后的流動相進(jìn)行超聲脫氣10-20分鐘。
(3)．打開HPLC工作站（包括計算機軟件和色譜儀），連接好流動相管道，連接檢測系統(tǒng)。
(4)．進(jìn)入HPLC控制界面主菜單，點擊manual，進(jìn)入手動菜單。
(5)．有一段時間沒用，或者換了新的流動相，需要先沖洗泵和進(jìn)樣閥。沖洗泵，直接在泵的出水口，用針頭抽取。沖洗進(jìn)樣閥，需要在manual菜單下，先點擊purge，再點擊start，沖洗時速度不要超過10 ml/min。
(6)．調(diào)節(jié)流量，初次使用新的流動相，可以先試一下壓力，流速越大，壓力越大，一般不要超過2000。點擊injure，選用合適的流速，點擊on，走基線，觀察基線的情況。
(7)．設(shè)計走樣方法。點擊file，選取select users and methods，可以選取現(xiàn)有的各種走樣方法。若需建立一個新的方法，點擊new method。選取需要的配件，包括進(jìn)樣閥，泵，檢測器等，根據(jù)需要而不同。選完后，點擊protocol。一個完整的走樣方法需要包括：a.進(jìn)樣前的穩(wěn)流，一般2-5分鐘；b.基線歸零；c.進(jìn)樣閥的loading-inject轉(zhuǎn)換；d.走樣時間，隨不同的樣品而不同。
(8)．進(jìn)樣和進(jìn)樣后操作。選定走樣方法，點擊start。進(jìn)樣，所有的樣品均需過濾。方法走完后，點擊postrun，可記錄數(shù)據(jù)和做標(biāo)記等。全部樣品走完后，再用上面的方法走一段基線，洗掉剩余物。
(9)．關(guān)機時，先關(guān)計算機，再關(guān)液相色譜。
(10)．填寫登記本，由負(fù)責(zé)人簽字。
二、高效液相色譜儀使用步驟詳細(xì)操作
1、開機設(shè)定參數(shù)（檢測波長、流速），更換所需流動相，檢查色譜柱是否正確。
2、排液置換管路中流動相，沖洗進(jìn)樣閥，洗好進(jìn)樣針。
3、沖洗色譜柱進(jìn)行平衡，其間可提前進(jìn)行樣品的處理，樣品信息的注冊。
4、平衡好以后進(jìn)空白試驗，排除系統(tǒng)污染。
5、柱子穩(wěn)定好以后進(jìn)樣，等待運行結(jié)束（其間清洗進(jìn)樣針），積分計算，出具報告。
詳細(xì)操作步驟如下：
1、開機操作：
?。?）、打開電源，用Harb相連接時，注意Harb電源，打開計算機，打開Bootp Server（一般啟動時已打開）；
（2）、自上而下打開個組件電源，Bootp Server里顯示有信號時（有六行字符），打開工作站（先打開On line）；
?。?）、打開沖洗泵頭的10％異丙醇溶液的開關(guān)（需用針捅抽），控制流量大小，以能流出的最小流量為準(zhǔn)；
?。?）、注意各流動相所剩溶液的容積設(shè)定，若設(shè)定的容積低于限會自動停泵，注意洗泵溶液的體積，及時加液；
?。?）、使用過程中要經(jīng)常觀察儀器工作狀態(tài)，及時正確處理各種突發(fā)事件。
2、先以所用流動相沖洗系統(tǒng)一定時間（如所用流動相為含鹽流動相，必須先用水沖洗20分鐘以上再換上含鹽流動相），正式進(jìn)樣分析前30min左右開啟D燈或W燈，以延長燈的使用壽命；
3、建立色譜操作方法，注意保存為自己命名的Method，勿覆蓋或刪除他人的方法及實驗結(jié)果；
4、使用手動進(jìn)樣器進(jìn)樣時，在進(jìn)樣前和進(jìn)樣后都需用洗針液洗凈進(jìn)樣針筒，洗針液一般選擇與樣品液一致的溶劑，進(jìn)樣前必須用樣品液清洗進(jìn)樣針筒3遍以上，并排除針筒中的氣泡；
5、溶劑瓶中的沙芯過濾頭容易破碎，在更換流動相時注意保護(hù)，當(dāng)發(fā)現(xiàn)過濾頭變臟或長菌時，不可用超聲洗滌，可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗滌；
6、實驗結(jié)束后，一般先用水或低濃度甲醇水溶液沖洗整個管路30分鐘以上，再用甲醇沖洗。沖洗過程中關(guān)閉D燈、W燈；
7、關(guān)機時，先關(guān)閉泵、檢測器等，再關(guān)閉工作站，然后關(guān)機，最后自下而上關(guān)閉色譜儀各組件，關(guān)閉洗泵溶液的開關(guān)；
8、使用者須認(rèn)真履行儀器使用登記制度，不要擅自拆卸儀器。
流動相：
1、流動相應(yīng)選用色譜純試劑、高純水或雙蒸水，酸堿液及緩沖液需經(jīng)過濾后使用，過濾時注意區(qū)分水系膜和油系膜的使用范圍；
2、水相流動相需經(jīng)常更換（一般不超過2天），防止長菌變質(zhì)；
3、使用雙泵時，A、B、C、D四相中，若所用流動相中有含鹽流動相，則A、D（進(jìn)液口位于混合器下方）放置含鹽流動相，B、C（進(jìn)液口位于混合器上方）放置不含鹽流動相；
A、B、C、D四個儲液器中其中一個為棕色瓶，用于存放水相流動相。
樣品：
1、采用過濾或離心方法處理樣品，確保樣品中不含固體顆粒；
2、用流動相或比流動相弱（若為反相柱，則極性比流動相大；若為正相柱，則極性比流動相?。┑娜軇┲苽錁悠啡芤?，盡量用流動相制備樣品液；
手動進(jìn)樣時，進(jìn)樣量盡量小，使用定量管定量時，進(jìn)樣體積應(yīng)為定量管的3～5倍；
色譜柱：
1、使用前仔細(xì)閱讀色譜柱附帶的說明書，注意適用范圍，如pH值范圍、流動相類型等；
2、使用符合要求的流動相；
3、使用保護(hù)柱；
4、如所用流動相為含鹽流動相，反相色譜柱使用后，先用水或低濃度甲醇水（如5％甲醇水溶液），再用甲醇沖洗。
5、色譜柱在不使用時，應(yīng)用甲醇沖洗，取下后緊密封閉兩端保存；
6、不要高壓沖洗柱子；
7、不要在高溫下長時間使用硅膠鍵合相色譜柱；
三、Waters 2695 型高效液相色譜儀操作方法
1儀器組成及開機
1.1儀器組成本儀器由Waters 2695分離單元、2996型二極管陣列檢測器、2420蒸發(fā)光散射檢測器、色譜管理工作站和打印機組成。
2695分離單元包括四元梯度洗脫的溶劑輸送系統(tǒng)，四通道在線真空脫氣機（或氦氣脫氣機），可容納120個樣品瓶的自動進(jìn)樣系統(tǒng)，柱溫箱，內(nèi)置的柱塞桿密封墊清洗系統(tǒng)，溶劑瓶托盤，液晶顯示器，鍵盤用戶界面及軟盤驅(qū)動器。
1.2開機依次接通2695分離單元、檢測器、計算機和打印機的電源。接通2695分離單元后，約20s儀器開始自檢，約1min后，顯示主屏幕，此時繼續(xù)各部件的初始化，待主屏幕上方標(biāo)題區(qū)出現(xiàn)“Idle”時，儀器進(jìn)入待命狀態(tài)。
2溶劑管理系統(tǒng)的準(zhǔn)備
2.1流動相脫氣確認(rèn)所有溶劑管路都充滿溶劑，按【Menu/Status】，進(jìn)入“Status（1）”屏幕，光標(biāo)選“Degasser”，按【Enter】，顯示選項屏幕，光標(biāo)下移選“Continuous”，按【Enter】。
2.2啟動溶劑管理系統(tǒng)
2.2.1干啟動當(dāng)溶劑的管路是干的或是需要更換溶劑時，在“Status（1）”屏幕下，按【Direct Function】，光標(biāo)選“Dry Prime”，按【Enter】，顯示“Dry Prime”屏幕，按欲啟動的溶劑管路的屏幕鍵，如【OpenA】，光標(biāo)選“Duration”，按數(shù)字鍵輸入5min，按【Continue】，待限定時間結(jié)束后，重復(fù)操作，使實驗所需的各溶劑管路均啟動、排氣并充滿流動相。
2.2.2濕啟動在“Status（1）”屏幕下，光標(biāo)選“Compomtion”中欲使用的流動相，輸入10 0％，按【Direct Function】，光標(biāo)選“Wet Prime”，按【Enter】，顯示“Wet Prime”屏幕，輸入7.5Ml/min和6min，按【OK】，待限定時間結(jié)束后，對每種流動相重復(fù)操作。
2.2.3平衡真空脫氣機在“Status（1）”屏幕下，光標(biāo)選“Composition”，輸入流動相的組成，按【Enter】再用光標(biāo)選“Degasser”中的“Normal”，按【Enter】，按【Direct Function】，光標(biāo)選“Wet Prime”，輸入0.000mL/min和10min.，按【OK】。待限定時間結(jié)束后，按【Abort Prime】。
3樣品管理系統(tǒng)的準(zhǔn)備
3.1沖洗自動進(jìn)樣器在“Status（1）”屏幕下，光標(biāo)選“Composition”，輸入流動相的組成。按【Direct Function】，光標(biāo)選“PurgeInjector”，按【Enter】，顯示“Purge Injector”屏幕，輸入“Sample Loop Volumes 6.0”，光標(biāo)下移“Compression Check”，按任意數(shù)字鍵，按【OK】。
3.2沖洗進(jìn)樣針在主屏幕下，按【Diag】，顯示“Diagnositcs”屏幕，按【Prime Ndl Wash】，顯示“Prime Needle Wash”屏幕，按【Start】，30s內(nèi)應(yīng)見溶劑從廢液排放口流出。按【Close】、【Exit】。
3.3沖洗柱塞桿密封墊在主屏幕下，按【Diag】，顯示“Diagnosities”屏幕，按Prime Seal Wash，顯示“Prime Seal Wash”屏幕，按【Start】，待排放口有水流出，按【Halt】、【Close】、【Exit】。
3.4裝入樣品與轉(zhuǎn)盤將樣品瓶插到樣品盤合適的位置，打開樣品倉門，顯示“Door is Open”屏幕，裝入樣品盤，按【Next】，直至所有樣品盤裝畢，關(guān)倉門。
4編輯分析方法及執(zhí)行樣品分析表
在主屏幕下，按【Develop Methods】，顯示“Methods”屏幕。
4.1編輯分析方法
4.1.1建立新的分離方法在“Method”屏幕下，按【New】、【Separation Methods】，輸入方法名，按【Enter】，顯示分離方法屏幕，該屏幕共有6頁，通過按【Next】或【Prev】切換。如需設(shè)定梯度，在第（1）頁按【Gradient】，輸入后按【Exit】；如需設(shè)定色譜柱的溫度，在第（4）頁輸入后按【Exit】；在第（6）頁設(shè)定檢測器的種類，光標(biāo)選“Absorbance Detector”，按【Enter】，光標(biāo)選“48 6﹨2487”，按Abs（1）圖標(biāo)，設(shè)定檢測波長，按【OK】、【Exit】、【Save】。
4.1.2編輯已建立的分離方法在“Methods”屏幕下，光標(biāo)選欲編輯﹨修改的分離方法的圖標(biāo)，按【Edit】，編輯改各種分析參數(shù)，按【Exit】、【Save】。
4.2編輯執(zhí)行樣品分析表
4.2.1建立新的樣品組在“Methods”屏幕下，按【New】、【Sample Set】，輸入樣品組名，按【Enter】，顯示方法組屏幕，在樣品組表中輸入待分析樣品的信息。在“Vial”中輸入樣品放置的位置；在“Function”中光標(biāo)選擇“Sandard”或“Sample”；在“Method”中選擇已建立的方法；在“inj”中輸入進(jìn)樣的次數(shù)；在“μL”中輸入進(jìn)樣的體積；在“min”中輸入運行時間。按【Exit】、【Save】。
4.2.2編輯已建立的樣品組在“Methods”屏幕下，光標(biāo)選欲編輯﹨修改的方法組的圖標(biāo)，按【Edit】，編輯﹨修改待分析樣品的信息，按【Exit】、【Save】。
5運行樣品
5.1在“Status（1）”屏幕下，光標(biāo)選“Method”，按【Enter】，選已建立的分離方法；光標(biāo)選“Flow”，輸入流速，光標(biāo)選“Composition”，輸入流動相的組成。
5.2在主屏幕下，按【Run Samples】，光標(biāo)選已建立的樣品組，按【Run】、【Satrt】。
6報告打印
在主屏幕下，按【Config】，顯示“Configuration”屏幕，按【Reports】，在“Report Options”對話框中選擇欲輸出到打印機或軟盤的信息，按【OK】、【Exit】。
7關(guān)機
7.1使用完畢，按規(guī)定用適當(dāng)?shù)娜軇_洗色譜柱、系統(tǒng)管路、自動進(jìn)樣器、進(jìn)樣針和柱塞桿密封墊，確保2695分離單元已沖洗干凈后，關(guān)閉電源開關(guān)。
7.2數(shù)據(jù)采集完畢后，關(guān)閉檢測器電源開關(guān)。
7.3處理數(shù)據(jù)并打印報告后，關(guān)閉計算機和打印機電源開關(guān)，并做使用登記。
附注：
（1）2695分離單元除用上述的系統(tǒng)控制模式外，還可設(shè)置非交互模式和色譜工作
站控制模式，詳見儀器使用說明書。
?。?）色譜管理工作站
?、倥渲冒惭b了數(shù)據(jù)處理軟件的計算機。
?、跀?shù)據(jù)處理如果使用Waters的Millennium色譜管理工作站控制2695分離單元分析測定樣品，當(dāng)工作站采集數(shù)據(jù)時，2695分離單元屏幕上方的標(biāo)題區(qū)出現(xiàn)“Remote”。色譜管理工作站的基本操作步驟為：設(shè)置一個含有2695分離單元的色譜系統(tǒng)，建立一個含有2695分離單元的儀器方法，用已獲得的儀器方法建立一個方法組，用已建立的方法組運行樣品，處理并打印出色譜運行所得到的數(shù)據(jù)
四、高效液相色譜儀注意事項
高效液相色譜法(HPLC)是目前應(yīng)用廣泛的分離、分析、純化有機化合物(包括能通過化學(xué)反應(yīng)轉(zhuǎn)變?yōu)橛袡C化合物的無機物)的有效方法之一。 在已知的有機化合物中，約有80%能用高效液相色譜法分離、分析，而且由于此法條件溫和，不破壞樣品，因此特別適合高沸點、難氣化揮發(fā)、熱穩(wěn)定性差的有機化合物和生命物質(zhì)。
高效液相色譜儀是在經(jīng)典液相柱色譜儀的基礎(chǔ)上，引入了氣相色譜儀的理論，采用了高壓、高效固定相、梯度洗脫技術(shù)和高靈敏度檢測器，具有高壓、高速、高效、高靈敏度、高選擇性和應(yīng)用范圍廣等特點。
高效液相色譜儀使用注意事項:
1、高效液相色譜的流動相應(yīng)采用色譜純?nèi)軇?，以滿足儀器要求、避免損壞色譜柱;
2、嚴(yán)禁使用有污染的水等沖洗色譜柱，避免將互不相溶的溶劑一同進(jìn)入泵內(nèi);
3、流動相需經(jīng)過濾、除氣后方可使用;
4、待分析的樣品必須溶解澄清、過濾，以避免堵塞、損壞色譜柱;
5、分析完成后，須注意及時清洗色譜柱和檢測器的比色池。
五、高效液相色譜柱標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP)
為啥要學(xué)習(xí)使用高效液相色譜柱？
色譜柱的使用和保養(yǎng)：液相色譜儀由高壓液體泵、檢測器及液相色譜柱等三部分組成，其中液相色譜柱的正確安裝和使用，是液相色譜工作的關(guān)鍵；也是液相色譜工作者獲得正確可靠的實驗數(shù)據(jù)的必經(jīng)之路，建立高效液相色譜柱日常維護(hù)與保養(yǎng)規(guī)程，保證能正常使用。
液相色譜柱的安裝
1、液相色譜柱的結(jié)構(gòu)：
（1）液相色譜柱由柱管、壓帽、卡套（密封環(huán)）、篩板（濾片）、接頭、螺絲（封頭）與柱填料等組成。
柱管：多用不銹鋼制成，若果使用時柱壓不高于70kg/cm2時，也可采用厚壁玻璃或石英管，管內(nèi)壁要求有很高的光潔度。用于柱填料的裝填?？罩鹘M件均為不銹鋼材質(zhì)，能耐受一般的溶劑作用。但由于含氯化物的溶劑對其有一定的腐蝕性，故使用時要注意，柱及連接管內(nèi)不能長時間存留此類溶劑，以避免腐蝕。壓帽：即色譜柱兩端套合于柱管端外壁的塑性圓柱帽，中部有小孔，多為聚四氟乙烯制成，用于固定篩板。
密封環(huán)：位于接頭螺旋環(huán)內(nèi)壁的彈性環(huán)，多為聚四氟乙烯制成，用于色譜柱兩端壓帽與柱外壁的密封。
（2）柱填料：
液相色譜柱的分離作用是在填料與流動相之間進(jìn)行的，柱子的分類是依據(jù)填料類型而定。
正相柱：
多以硅膠為柱填料。根據(jù)外型可分為無定型和球型兩種，其顆粒直徑在3-10μm的范圍內(nèi)。另一類正相填料是硅膠表面鍵合-CN，-NH2等官能團(tuán)即所謂的鍵合相硅膠。
反相柱：
主要是以硅膠為基質(zhì)，在其表面鍵合十八烷基官能團(tuán)(ODS)的非極性填料。也有無定型和球型之分。
常用的其他的反相填料還有鍵合C8、C4、C2、苯基等，其顆粒粒徑在3-10μm之間。
2、色譜柱的安裝：
（1）拆開柱包裝盒，確認(rèn)色譜柱的類型、尺寸、出廠日期以及柱內(nèi)貯存的溶劑。
（2）擰下柱兩端接頭的密封堵頭放回包裝盒供備用。
（3）按柱管上標(biāo)示的流動相流向，將色譜柱的入口端通過連接管與進(jìn)樣閥出口相連接(如，條件允許，建議在柱前使用保護(hù)柱)；柱的出口與檢測器連接。連接管是外徑為1.57 mm、內(nèi)徑為0、1～0.3 mm的不銹鋼管。連接管的兩端均有空心螺釘及密封用壓環(huán)。在接管時一定要設(shè)法降低柱外死體積。連接管通過空心螺釘、壓環(huán)后盡量用力插到底，然后順時針擰緊空心螺釘，直到擰不動為止。
液相色譜柱的使用
色譜柱在使用前，進(jìn)行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進(jìn)行(出廠測試所使用的條件是更佳條件)，只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。
1、樣品的前處理：
（1）使用流動相溶解樣品；
（2）使用予處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)；
（3）使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)；
2、流動相的配制：
液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此，要求流動相具備以下的特點：
（1）流動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)。
（2）流動相具有一定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外)。
（3）流動相的黏度要盡量小，以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果；同時，降低柱壓降，延長液體泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。
（4）流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)，如使用UV檢測器，使用對紫外吸收較低的溶劑配制。
（5）流動相沸點不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實驗無法進(jìn)行。
（6）在流動相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
3、 流速的選擇：
因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱，要追求更佳柱效，使用更佳流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1mL/min，對于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8mL/min為佳。當(dāng)選用更佳流速時，分析時間可能延長?？刹捎酶淖兞鲃酉嗟南礈鞆姸鹊姆椒ㄒ钥s短分析時間(如，使用反相柱時，可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量)。
4、 流動相使用注意事項：
（1）由于甲醇廉價，對于反相柱推薦使用甲醇體系(必須使用乙腈的場合除外)。
（2）對于正相柱推薦使用沸程為30-60℃的石油醚或提純后的己烷作流動相，沒有提純的己烷不得使用。用水使用超純水(電阻率大于18兆歐)，去離子水及雙蒸水中含有酚類雜質(zhì)，有可能影響分析結(jié)果。
（3）含水流動相在實驗前配制，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要過夜。加入xx，防止細(xì)菌生長。
（4）流動相要求使用0.45μm濾膜過濾，除去微粒雜質(zhì)。
（5）使用HPLC級溶劑配制流動相，使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命，提高柱性能。
液相色譜柱的保存
1、反向色譜柱實驗后的保養(yǎng)：
使用緩沖液或含鹽的流動相，實驗完后應(yīng)用10%的甲醇/水沖洗30分鐘，洗掉色譜柱中的鹽，再用甲醇沖洗30分鐘。注意：不能用純水沖洗柱子，應(yīng)該在水中加入10%的甲醇，防止將填料沖塌陷。
2、長期保存色譜柱：
如，色譜柱要長時間保存，必須存于合適的溶劑下，對于反相柱可以儲存于純甲醇或乙腈中，正相柱可以儲存于嚴(yán)格脫水后的純正己烷中，離子交換柱可以儲存于水(含防腐劑或硫柳汞)中，并將堵頭堵上，儲存溫度應(yīng)該是室溫。
液相色譜柱的再生
因為，色譜柱是消耗品，隨著使用時間或進(jìn)樣次數(shù)的增加，會出現(xiàn)色譜峰高降低，峰寬加大或出現(xiàn)肩峰的現(xiàn)象，一般來說是柱效的下降。
1、反向柱的再生：
依次采用20～30倍的色譜柱體積的甲醇:水=10:90(V/V)，乙腈，異丙醇作為流動相沖洗色譜柱，完成后再以相反順序沖洗色譜柱。
2、正相柱的再生：
依次以20～30倍的色譜柱體積正己烷、異丙醇(異丙醇粘度大，可降低流速，避免壓力過高)、二氯甲烷、甲醇作為流動相沖洗色譜柱，然后再以相反的順序沖洗色譜柱。要注意以上溶劑必須嚴(yán)格脫水。
3、離子交換柱的再生：
長時間在緩沖溶液中使用和進(jìn)樣，將導(dǎo)致色譜柱離子交換能力下降。用稀酸緩沖溶液沖洗可以使陽離子柱再生，反之，用稀堿緩沖溶液沖洗可以使陰離子柱再生。
特別說明：
再生過程必須隨時關(guān)注柱壓變化，柱壓過高易導(dǎo)致硅膠變形與開裂及鍵合相極性端連接順序紊亂，同時要保證再生時間足夠。再生時選擇不具備在線脫氣的獨立泵送系統(tǒng)色譜儀器進(jìn)行，以防正相溶劑損壞脫氣機密封膜或分子篩及比例閥等儀器精密部件。
液相色譜柱常見問題分析與解決方案
1、使用一段時間后柱壓過高：
解決方案：首先查看是否HPLC系統(tǒng)原因，排除系統(tǒng)原因后，原因基本是由于實驗過程中雜質(zhì)在柱中的累積。盡量*操作條件，做完樣品后要及時沖洗干凈，如緩沖鹽的流動相一定要用高比例的水溶液(如，90%)沖洗后再用有機相保存。
2、篩板堵塞與柱頭塌陷：
解決方法：如確定是色譜柱頭的過濾篩板被污染，可以將色譜柱反方向用甲醇沖洗至正常壓力，或者卸下色譜柱頭，小心取下篩板，用5%左右的硝酸溶液超聲處理20分鐘左右，再用純水超聲20分鐘左右，重新裝入色譜柱。
3、色譜柱頭的填料被樣品污染：
解決方法：
如確定色譜柱頭的填料被污染，將柱頭螺絲卸下，挖出柱內(nèi)前段被污染的填料，用相同的柱填料重新填入，仔細(xì)修復(fù)后，重新安裝上柱頭螺絲。
4、色譜柱內(nèi)緩沖液中的鹽遇到高濃度的甲醇或其他有機溶劑，形成結(jié)晶析出：
解決方法：
如確定是鹽結(jié)晶，用10%的甲醇/水沖洗色譜柱使柱內(nèi)鹽全部溶解，再換高濃度甲醇。
注意事項：
1、無論何時，必須保證色譜柱柱床不干涸，尤其是進(jìn)樣檢測和柱沖洗過程中不能讓流動相長時間(30min以上)走空，否則易使色譜柱干涸且?guī)氪罅繋缀鯚o法排出的氣泡，甚至導(dǎo)致柱床局部塌陷或中部開裂。
2、使用與保存時，嚴(yán)禁用力甩，杜絕不小心猛烈撞擊或高處掉落，否則，易導(dǎo)致柱床機械性損壞，則再無再生可能。
3、當(dāng)柱子和液相色譜儀聯(lián)結(jié)時，閥件或管路一定要清洗干凈；
4、避免使用高粘度的溶劑作為流動相；
5、進(jìn)樣樣品要全溶解；
6、大多數(shù)反相色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是2～7.5，盡量不超過該色譜柱的pH范圍；
7、每天分析工作結(jié)束后，要清洗進(jìn)樣閥中殘留的樣品；
8、每天分析測定結(jié)束后，都要用適當(dāng)?shù)娜軇﹣砬逑粗?/div>
9、若分析柱長期不使用，應(yīng)用適當(dāng)有機溶劑保存并封閉。
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