查看用于流式細(xì)胞分析的所有細(xì)胞凋亡試驗(yàn)的選擇指南。
對(duì)線粒體變化具有選擇性
膜可透過性 JC-1 染料廣泛用于細(xì)胞凋亡研究,以監(jiān)測線粒體健康。熒光發(fā)射光由綠色 (~529 nm) 轉(zhuǎn)變?yōu)榧t色 (~590 nm),表明 JC-1 染料蓄積在線粒體中并呈電位依懶性特征。因此,紅色/綠色熒光強(qiáng)度比例降低代表線粒體去極化。電位敏感顏色變化是由于紅色熒光 J 聚集體的濃度依賴性形成所致。
與其他受質(zhì)膜電位影響的線粒體染色不同,JC-1 的綠紅熒光比僅取決于膜電位,而并不取決于其他可能影響單組分熒光信號(hào)的因素,如線粒體大小、形狀和密度。使用熒光比檢測使研究人員能夠?qū)δる娢贿M(jìn)行比較測量,并確定群體內(nèi)對(duì)所施加的刺激有反應(yīng)的線粒體百分比。
早期細(xì)胞凋亡的指標(biāo)
早期程序性細(xì)胞死亡的特殊特點(diǎn)是活動(dòng)性線粒體破裂。線粒體破裂包括膜電位的變化以及線粒體氧化-還原電位的改變。膜電位改變的原因可能是由于線粒體轉(zhuǎn)換孔開放(MPTP),使得離子與小分子進(jìn)入線粒體所致。由此產(chǎn)生的離子平衡從而導(dǎo)致呼吸鏈解耦和 釋放到細(xì)胞溶質(zhì)中。
簡單、簡化方案
使用 JC-1 等雙發(fā)射染料的較大挑戰(zhàn)之一是補(bǔ)償。MitoProbe™ JC-1 檢測試劑盒提供線粒體膜電位干擾物 CCCP,以產(chǎn)生補(bǔ)償控制,從而獲得正確補(bǔ)償?shù)木G紅熒光比。染色方案簡單直接:用 JC-1 染料孵育細(xì)胞,然后在 FITC 和 PE 通道中使用 488 nm 激光分析熒光信號(hào)。


















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