染料法支原體污染實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒

Dye-quantitative Real-time PCR Kit for Mycoplasma contamination

貨號(hào)：Myco-qs-20，規(guī)格：20個(gè)反應(yīng)

貨號(hào)：Myco-qs-20，規(guī)格：20個(gè)反應(yīng)

貨號(hào)：Myco-qs-20，規(guī)格：20個(gè)反應(yīng)

儲(chǔ)存：-20度，避光保存，有效期一年。避免反復(fù)凍融。

試劑盒特點(diǎn)：

1， 對(duì)柔膜菌綱（包括支原體、螺原體和無(wú)膽甾原體）有極-強(qiáng)的特異性，與柔膜菌綱以外的其他基因組無(wú)交叉反應(yīng)。

2， 靈敏度高，最-低可檢出反應(yīng)液中2-4個(gè)基因組。

3， 使用熱啟動(dòng)的Taq酶，可抑制非特異性擴(kuò)增，降低背景熒光。

4， 帶有陽(yáng)性對(duì)照樣品，可用于檢驗(yàn)試劑盒有效性，也可用于驗(yàn)證待測(cè)樣品中是否含有PCR抑制劑。

5， 帶有ROX參比染料，幫助校正加樣誤差和管間差異。

支原體(Mycoplasma)屬于柔膜菌（Mollicutes）綱,也有稱(chēng)為霉形體、霉?jié){菌或微漿菌，直徑約0.1-0.3 µm,具有變形能力，因此可以輕易穿過(guò)常規(guī)的0.22 µm無(wú)菌濾膜,是常見(jiàn)的動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)污染源。由于支原體體積太小，在光學(xué)顯微鏡下不可分辨，因此細(xì)胞常常在不知不覺(jué)中被污染。

目前的經(jīng)典檢測(cè)方法是歐洲藥典（European Pharmacopeia）2.6.7規(guī)定的體外培養(yǎng)法，用特殊培養(yǎng)基對(duì)支原體進(jìn)行培養(yǎng)，以此檢測(cè)污染情況。培養(yǎng)法的優(yōu)點(diǎn)是檢測(cè)靈敏度高，缺點(diǎn)是耗時(shí)較長(zhǎng)，最長(zhǎng)的需要28天之久，而且受操作人員的技能水平影響較大，不同實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)誤差較大。隨著生物制藥業(yè)的發(fā)展，很多生物制品保質(zhì)期較短，因此需要一種快速、靈敏并且特異性強(qiáng)的支原體檢測(cè)方法。歐洲藥典因此接納了核酸檢測(cè)方法作為培養(yǎng)法的替代方案。定量PCR法可以在幾個(gè)小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)，靈敏度與培養(yǎng)法相當(dāng)，甚至更好。

本試劑盒以16S rRNA基因?yàn)榘悬c(diǎn)，設(shè)計(jì)了多對(duì)引物，可檢出絕大部分已知的支原體，以及部分螺原體和無(wú)膽甾原體，與親緣關(guān)系較近的革蘭氏陽(yáng)性菌，如鏈球菌、梭菌、乳桿菌等，沒(méi)有交叉反應(yīng)，在檢測(cè)范圍和特異性方面達(dá)到歐洲藥典的要求。歐洲藥典提及的所有支原體均在本試劑盒的檢測(cè)范圍內(nèi)。靈敏度方面，最-低檢測(cè)值可以達(dá)到每個(gè)反應(yīng)2-4個(gè)基因組，在不考慮DNA提取損耗的情況下，達(dá)到歐洲藥典要求的10 CFU/mL的最-低檢測(cè)值。本試劑盒可作為支原體通用檢測(cè)試劑盒使用，但不適用于嗜血支原體的檢測(cè)。

本試劑盒包含熱啟動(dòng)Taq酶、dNTP（以UTP代替了TTP）、引物、陽(yáng)性對(duì)照品、SYBR Green I染料、ROX染料，和用以防止殘余DNA污染的UDG，用戶(hù)只需準(zhǔn)備好DNA樣品即可使用。

注意事項(xiàng)：

1，  本產(chǎn)品僅限于科研使用，不作診斷用途。

2，  操作過(guò)程中應(yīng)注意防范樣品之間的串聯(lián)污染。建議對(duì)工作區(qū)域進(jìn)行劃分，將不同步驟，如DNA提取和PCR反應(yīng)液的配制，分開(kāi)在不同階段不同區(qū)域進(jìn)行。使用無(wú)污染的一次性槍頭，建議用帶濾芯的槍頭。建議在通風(fēng)區(qū)域操作，操作時(shí)須佩戴無(wú)粉塵手套。

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